Anticorpo policlonale di coniglio Phospho-p90Rsk/RSK1/RPS6KA1-T359/S363 per WB, ELISA - Q15418

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RPS6KA1/RSK1

• Identità proteica: RPS6KA1 codifica per la chinasi della proteina ribosomiale S6 alfa-1 da 90 kDa (RSK1/p90RSK), una serina/treonina chinasi della famiglia p90RSK; lo splicing alternativo genera più isoforme.
• Effettore della via ERK-MAPK: Opera a valle di ERK1/2 per fosforilare i fattori di trascrizione CREB1, ETV1/ER81, NR4A1/NUR77 e il cofattore CREBBP, promuovendo l'espressione genica immediata-precoce e la mitogenesi.
  Riferimenti correlati: PMID:18508509 PMID:18813292 PMID:12213813 PMID:16223362
• Inizio della traduzione: Aumenta la traduzione dipendente dalla cappio fosforilando RPS6 e EIF4B in risposta all'insulina o ai fattori di crescita.
  Riferimenti correlati: PMID:16763566 PMID:17360704
• Modulatore della segnalazione mTOR: Regola l'attività di mTORC1 e mTORC2 attraverso la fosforilazione di TSC2 e RPTOR, e effettua un feedback tramite DEPTOR.
  Riferimenti correlati: PMID:15342917 PMID:22017876
• Effetti anti-apoptotici: Inibisce le proteine pro-apoptotiche BAD e DAPK1 e promuove la sopravvivenza delle cellule stellate epatiche e degli epatociti tramite fosforilazione di CEBPB.
  Riferimenti correlati: PMID:10679322 PMID:16213824 PMID:11684016 PMID:18508509 PMID:18813292
• Migrazione cellulare: Fosforila EPHA2 alla Ser-897 per controllare la motilità cellulare.
  Riferimenti correlati: PMID:26158630
• Localizzazione subcellulare e regolazione: Si sposta tra nucleo e citoplasma; l'attività chinasica è controllata da fosforilazione multisito, inclusi i residui Thr359 e Ser363 rilevanti per l'attivazione riconosciuti da questo anticorpo.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo fosfo-specifico è stato prodotto contro un peptide sintetico che porta Thr359 e Ser363 fosforilati. Per Western blotting, conferma la specificità pre-incubando l'anticorpo con il peptide non fosforilato o trattando i campioni con lambda fosfatasi prima dell'immunoblotting.
• In WB, utilizzare tamponi di bloccaggio leggeri o privi di fosfato (ad es. BSA o latte scremato in polvere senza inibitori di fosfatasi) per preservare il riconoscimento dell'antigene. Ottimizzare empiricamente la diluizione dell'anticorpo primario (tipicamente 1:500–1:2000) per il tipo di campione e il sistema di rilevazione in uso.
• Per ELISA, rivestire il fosfopeptide o l'estratto proteico e titolare l'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale. Si consiglia di utilizzare un peptide non fosforilato come controllo negativo.
• Indurre la fosforilazione di RPS6KA1 nelle linee cellulari umane trattando con EGF (50 ng/mL) o insulina (100 nM) per 15–30 minuti prima della lisi, poiché RSK1 è fortemente attivato dalla via ERK.
• La reattività incrociata è stata dimostrata per campioni umani; per altre specie, verificare l'identità di sequenza della regione dell'immunogeno prima dell'uso.

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