Anticorpo policlonale di coniglio Phospho-PI3KP85α/P55γ/P85β-Y467/Y464/Y199 per WB - P27986 / O00459 / Q92569

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione delle subunità regolatorie PI3K (p85α/p55γ/p85β)

• PIK3R1 codifica per la subunità alfa regolatoria della fosfatidilinositolo 3-chinasi, nota anche come p85-alfa della PI3-chinasi. Esistono più isoforme grazie allo splicing alternativo, inclusa l'isoforma 2 che è espressa nel muscolo scheletrico e nel cervello.
• La subunità p85-alfa agisce da adattatore, legandosi alle proteine-tirosin chinasi attivate (fosforilate) tramite il suo dominio SH2, mediando l'associazione della subunità catalitica p110 alla membrana plasmatica.
• È necessaria per l'assorbimento del glucosio stimolato dall'insulina e per la sintesi del glicogeno nei tessuti sensibili all'insulina, svolgendo un ruolo chiave nella segnalazione insulinica.
• Svolge un ruolo nella segnalazione a valle di diversi recettori dei fattori di crescita tra cui FGFR1-4, KIT, PDGFRA e PDGFRB, nonché nella segnalazione dell'integrina ITGB2. Riferimenti correlati: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• Modula la risposta cellulare allo stress ER promuovendo la traslocazione nucleare dell'isoforma 2 di XBP1, contribuendo al miglioramento della tolleranza al glucosio in condizioni di sovraccarico metabolico nel fegato. Riferimenti correlati: PMID:20348923
• Si localizza principalmente nel citoplasma, dove interagisce con molteplici partner di segnalazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione (su residui di tirosina come Y467), acetilazione e ubiquitinazione, che regolano la sua attività e stabilità.
• La disregolazione dei componenti della via PI3K è implicata nel cancro, nei disturbi metabolici e nelle malattie dello sviluppo come il nanismo.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosfo-specifico corrispondente ai residui che circondano Y467 di PIK3R1/PIK3R2/PIK3R3 umano. Grazie alla conservazione della sequenza, l'anticorpo presenta reattività incrociata con le specie topo e ratto.
• Per Western blot, denaturare i campioni nel buffer Laemmli e caricare 20–30 µg di proteina totale per pozzetto. Le bande rilevate possono comparire tra 42–54 kDa (p55γ/p85β) e 81–84 kDa (p85α), a seconda dell'isoforma specifica.
• Gli anticorpi specifici per fosforilazione richiedono una manipolazione accurata: evitare cicli ripetuti di congelamento e scongelamento e considerare l'uso di inibitori delle fosfatasi durante la preparazione dei campioni per preservare i segnali di fosforilazione.
• Includere controlli positivi appropriati (ad esempio lisati cellulari trattati con insulina o fattori di crescita) e controlli negativi (blocco con peptide non fosforilato o trattamento con fosfatasi) per confermare la specificità.

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