Fosfo-PKA RIIα (PRKAR2A)-S99 Coniglio mAb per WB e ELISA - P13861

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PRKAR2A

• PRKAR2A codifica per la subunità regolatoria alfa II della proteina chinasi dipendente da cAMP, un componente chiave dell'oloenzima PKA che modula le risposte cellulari al cAMP.
• Come subunità regolatoria del PKA, si lega al cAMP, portando alla dissociazione e all'attivazione delle subunità catalitiche, che poi fosforilano i bersagli a valle coinvolti nel metabolismo, nell'espressione genica e nella proliferazione cellulare.
• Le subunità regolatorie di tipo II mediano l'associazione di membrana legandosi alle proteine di ancoraggio della chinasi A (AKAP), inclusa la chinasi MAP2, localizzando così l'attività PKA a compartimenti subcellulari specifici.
• Il genoma umano contiene quattro tipi di subunità regolatorie (I-alfa, I-beta, II-alfa e II-beta); PRKAR2A appartiene alla classe II-alfa e la sua espressione varia tra i tessuti, sendo costitutiva in alcuni e inducibile in altri.
• PRKAR2A è localizzato prevalentemente nel citoplasma e può associarsi alla membrana cellulare attraverso interazioni con proteine di ancoraggio, consentendo il controllo spaziale della segnalazione cAMP.
• La proteina subisce modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione a più siti (es. Ser99) e l'acetilazione, che regolano la sua attività, stabilità o interazione con i partner.
• Lo splicing alternativo genera diverse isoforme e la proteina è classificata sotto parole chiave come Fosfoproteina, Acetilazione e Legame al cAMP, riflettendo i suoi ruoli regolatori dinamici.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico attorno a Ser99; considerare di verificare la fosfo-specificità confrontando i segnali tra campioni trattati e non trattati o utilizzando un controllo di blocco con non-fosfopeptide.
• Per il Western blotting, è prevista una banda vicino a 46 kDa; ottimizzare il blocco e la diluizione dell'anticorpo nel sistema di campione pertinente, poiché l'espressione endogena può variare.
• Nell'ELISA, utilizzare l'anticorpo per rilevare PRKAR2A fosforilata in lisati cellulari o tissutali; includere appropriati controlli positivi e negativi per confermare la specificità dell'analisi.
• La reattività crociata è confermata per umano e ratto; se si utilizzano campioni di topo, validare sperimentalmente la reattività crociata a causa di possibili differenze di sequenza.
• Dato il ruolo critico del PKA nella segnalazione, la fosforilazione a Ser99 può essere dinamica; considerare di stimolare o inibire le vie cAMP durante la progettazione degli esperimenti.

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