Anticorpo policlonale di coniglio Phospho-PLN-S16 per WB ed ELISA - P26678

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Fosforilambano

• La Fosforilambano (PLN) è una fosfoproteina transmembrana di 6.1 kDa che inibisce reversibilmente la Ca2+-ATPasi SERCA2 nel reticolo sarcoplasmatico cardiaco riducendo l'affinità apparente della pompa per il Ca2+, regolando così la contrattilità e il rilassamento cardiaco (PubMed:28890335). Riferimenti correlati: PMID:28890335
• La PLN lega preferenzialmente la conformazione E1 legata all'ATP di SERCA2, che predomina a basse concentrazioni diastoliche di Ca2+, e interrompe l'attivazione allosterica da parte dell'ATP per rallentare la ricaptazione del Ca2+ durante la diastole.
• Oltre a SERCA2, la PLN inibisce anche SERCA3 ed è implicata nell'omeostasi del calcio negli spermatidi allungati e nel nucleo reticolare talamico, influenzando potenzialmente la differenziazione delle cellule germinali e i comportamenti sonno/veglia.
• La fosforilazione della PLN in Ser16 (e Thr17) da parte di protein chinasi come PKA e CaMKII inverte l'inibizione di SERCA2, fungendo da nodo regolatorio critico nella segnalazione β-adrenergica e nella contrattilità cardiaca.
• A livello subcellulare, la PLN risiede nella membrana del reticolo sarcoplasmatico/endoplasmatico e nella membrana mitocondriale, ancorando le sue funzioni regolatorie negli organelli di gestione del calcio.
• La PLN è espressa prevalentemente nel muscolo cardiaco; mutazioni nella PLN causano cardiomiopatie ereditarie tra cui la cardiomiopatia dilatativa (CMD1P) e la cardiomiopatia ipertrofica (CMH18).
• La proteina subisce multiple modificazioni covalenti—palmitoilazione, acetilazione e fosforilazione—che influenzano il suo stato oligomerico, l'ancoraggio alla membrana e l'attività regolatoria.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente ai residui intorno a Ser16 della PLN umana; questo design arricchisce gli anticorpi che riconoscono l'epitopo fosforilato. Per ELISA e Western blot, considerare l'uso di peptide non fosforilato o lisati trattati con fosfatasi come controlli negativi per confermare la specificità della fosforilazione.
• A causa del basso peso molecolare della PLN (~6 kDa), le condizioni SDS-PAGE standard potrebbero non risolvere efficientemente la proteina; si consigliano gel ad alta percentuale (es. 15–20%) o Tricine-SDS-PAGE per la rilevazione in Western blot.
• L'anticorpo presenta reattività incrociata con la PLN di topo e ratto come indicato; convalidare la rilevazione della PLN fosforilata endogena nei lisati di tessuto cardiaco di queste specie, poiché la PLN è altamente espressa nel cuore.
• Per l'ELISA, la natura policlonale di coniglio può fornire un'accurata cattura/rilevazione sensibile; tuttavia, la coerenza lotto per lotto dovrebbe essere verificata per saggi quantitativi.
• Poiché la fosforilazione della PLN è regolata dinamicamente, una preparazione appropriata del campione con inibitori delle fosfatasi è essenziale per preservare il segnale fosfo-S16.

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