mAb coniglio anti Phospho-POLR2A CTD-S2 - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A

• POLR2A codifica la subunità maggiore dell'RNA polimerasi II, che catalizza la trascrizione dei precursori dell'mRNA e di molti RNA non codificanti.
• Forma il centro attivo con POLR2B, coordinando gli ioni Mg2+ per l'aggiunta di nucleotidi e la correzione degli errori tramite attività esonucleasica 3'->5'. Riferimenti correlati: PMID:30190596 PMID:8381534
• Contiene un dominio C-terminale (CTD) unico con 52 ripetizioni di eptapeptide (YSPTSPS) che funge da piattaforma per i fattori che regolano l'inizio, l'allungamento e la terminazione della trascrizione.
• La fosforilazione del CTD a livello di Ser5 promuove l'uscita dal promotore, mentre la fosforilazione di Ser2 è necessaria per il rilascio dalla pausa e la processazione del pre-mRNA. Riferimenti correlati: PMID:26124092
• L'acetilazione e la metilazione delle lisine del CTD regolano l'espressione genica, con la metilazione che ha un effetto repressivo.
• Esibisce attività di RNA-polimerasi dipendente dall'RNA, che estende gli RNA non codificanti all'estremità 3'.
• La localizzazione subcellulare comprende nucleo, citoplasma e cromosomi.
• Parole chiave pertinenti: fosfoproteina, acetilazione, metilazione, RNA polimerasi diretta dal DNA, trascrizione, idrolasi.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo fosfo-specifico riconosce POLR2A solo quando Ser2 nella ripetizione CTD è fosforilato. Aggiungi inibitori della fosfatasi nei buffer di lisi e di lavaggio per preservare il segnale di fosforilazione.
• Per l'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e il CUT&Tag, si consiglia di titolare l'anticorpo e ottimizzare le condizioni di cross-linking/sonicazione per i tuoi specifici loci bersaglio.
• L'anticorpo è adatto per Western blot (217 kDa), immunofluorescenza e immunoistochimica; validare nel sistema di campioni pertinente utilizzando controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, cellule non trattate vs cellule trattate con inibitori della chinasi).
• A causa dell'alto peso molecolare, utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale o tempi di trasferimento prolungati per la WB.

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