pAb di coniglio Phospho-POLR2A CTD- S2/S5 - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A

• La subunità RPB1 della RNA polimerasi II diretta dal DNA è la componente catalitica centrale della RNA polimerasi II (Pol II), responsabile della sintesi dei precursori dell'mRNA e di molti RNA non codificanti funzionali. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• Il ciclo di trascrizione della Pol II procede attraverso le fasi di inizio, allungamento e terminazione, con l'enzima che forma il centro attivo insieme alla seconda subunità più grande POLR2B/RPB2. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:28108474
• POLR2A aggiunge nucleotidi tramite un meccanismo dipendente da Mg(2+) e possiede un'attività di correzione di bozze esonucleasica 3' -> 5' per correggere i ribonucleotidi incorporati in modo errato. Riferimenti correlati: PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Il dominio C-terminale (CTD) unico, costituito da 52 ripetizioni eptapeptidiche, funge da piattaforma per la regolazione della trascrizione; la fosforilazione a livello di Ser5 media la fuga dal promotore, mentre la fosforilazione di Ser2 è necessaria per il rilascio dalla pausa e la processazione del pre-mRNA. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• Anche la metilazione e l'acetilazione del CTD regolano l'espressione genica: l'acetilazione è associata all'induzione dei geni immediati precoci, mentre la metilazione reprime l'espressione dei geni bersaglio.
• La localizzazione subcellulare include nucleo, citoplasma e cromosoma, coerente con i suoi ruoli nella trascrizione e nella processazione dell'RNA.
• POLR2A funziona anche come RNA polimerasi dipendente dall'RNA, estendendo gli RNA non codificanti e agendo come replicasi per il virus dell'epatite delta.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico progettato intorno ai siti di fosforilazione S2/S5 della ripetizione YSPTSPS del CTD di POLR2A, pertanto l'anticorpo può riconoscere sia Ser2 che Ser5 fosforilati.
• Per il Western blot, a causa dell'elevato peso molecolare (~217 kDa), si consiglia di utilizzare gel di SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6-8%) e tempi di trasferimento prolungati; per mantenere la fosforilazione è consigliabile aggiungere inibitori di fosfatasi nel buffer di lisit.
• La specificità può essere valutata trattando i campioni con lambda fosfatasi o tramite saggi di competizione peptidica.
• Nell'ELISA, utilizzare piastre rivestite con peptide fosforilato e confermare la reattività con controlli di peptide non fosforilato per valutare la fosfoselettività.
• Questo anticorpo è indicato per campioni umani; non è stata riportata reattività crociata con altre specie, pertanto si consiglia la validazione nel sistema di campioni di interesse.

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