Phospho-POLR2A CTD-S5 Rabbit mAb per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A (RPB1)

• POLR2A codifica la subunità RPB1 della RNA polimerasi II diretta dal DNA, la subunità catalitica più grande di Pol II, nota anche come RPB1, hRPB220 e POLR2 (UniProt P24928).
• Come componente catalitico principale di Pol II, RPB1 sintetizza precursori di mRNA e RNA non codificanti durante il ciclo di trascrizione di inizio, allungamento e terminazione. Riferimenti correlati: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Il dominio C-terminale (CTD) è composto da 52 ripetizioni eptapeptidiche e subisce fosforilazione dinamica: la fosforilazione di Ser5 promuove l'uscita dal promotore, mentre la fosforilazione di Ser2 consente il rilascio della pausa e l'allungamento. Riferimenti correlati: PMID:24207025 PMID:26124092
• RPB1 si localizza prevalentemente nel nucleo, con presenza aggiuntiva nel citoplasma e sui cromosomi durante la trascrizione.
• Le modifiche post-traduzionali del CTD includono acetilazione, metilazione e ubiquitinazione, che modulano l'inizio e l'allungamento della trascrizione, in particolare dei geni indotti dai fattori di crescita.
• RPB1 possiede anche attività RNA-polimerasi dipendente da RNA, implicata nell'estensione di RNA non codificanti e nelle interazioni ospite-virus, come la replicazione del virus dell'epatite delta.
• Le mutazioni in POLR2A sono collegate a disturbi dello neurosviluppo e disabilità intellettiva (parola chiave UniProt: Disabilità intellettiva, Variante della malattia).

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente ai residui circostanti Ser5 del CTD di POLR2A, garantendo la specificità per la forma fosforilata. Convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando il trattamento con fosfatasi o il blocco con peptide non fosforilato nel sistema di saggio.
• Per il Western blot, prevedere una banda a ~217 kDa; considerare l'uso di una percentuale appropriata di gel e condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare.
• L'anticorpo è convalidato per IHC-P e IF/ICC; ottimizzare le condizioni di recupero dell'antigene e di permeabilizzazione in base al tessuto o al tipo cellulare.
• La reattività crociata con topo e ratto suggerisce sequenze conservate in queste specie; confermare l'idoneità nel modello sperimentale.

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