Anticorpo Policlonale di Coniglio Fosfo-POLR2A CTD-T4 per WB, IP, ELISA, ChIP - P24928

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di POLR2A

• POLR2A codifica per la subunità più grande dell'RNA polimerasi II (Pol II), una proteina di ~217 kDa che funge da nucleo catalitico per la sintesi di RNA dipendente da DNA, essenziale per la produzione di mRNA e RNA non codificanti. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596
• Il dominio C-terminale (CTD) di POLR2A consiste di 52 ripetizioni in tandem di un eptapeptide (YSPTSPS) che subiscono fosforilazione dinamica, principalmente su Ser2 e Ser5, per regolare l'inizio, l'elongazione e la terminazione della trascrizione, nonché l'elaborazione co-trascrizionale dell'RNA. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A contiene un motivo DxDGD che coordina ioni Mg2+ essenziali per l'aggiunta di nucleotidi, e possiede anche un'attività esonucleasica 3'-5' per la correzione di bozze, garantendo un'elevata fedeltà trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:8381534, PMID:9852112
• Localizzato principalmente nel nucleo e sui cromosomi, POLR2A è stato rilevato anche nel citoplasma, riflettendo il suo trasporto dinamico e i suoi molteplici ruoli.
• Modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione di serina/treonina, acetilazione, metilazione e ubiquitinazione della lisina, modulano l'attività e la stabilità della Pol II.
• Lo splicing alternativo genera multiple isoforme, e mutazioni in POLR2A sono associate a disturbi del neurosviluppo, sottolineandone il significato clinico.
• Funziona anche come RNA polimerasi RNA-dipendente, estendendo RNA non codificanti, e agisce come replicasi per il virus dell'epatite delta durante l'infezione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Poiché l'immunogeno è un peptide fosfo-specifico corrispondente a T4 delle ripetizioni CTD di POLR2A, convalidare la specificità dell'anticorpo utilizzando la competizione con peptide non fosforilato o lisati cellulari trattati con fosfatasi per confermare la dipendenza dalla fosforilazione.
• Per il Western blotting (WB), a causa delle grandi dimensioni proteiche (~217 kDa), considerare l'uso di gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6-8%) e tempi di trasferimento prolungati per garantire un trasferimento efficiente di POLR2A a lunghezza intera.
• L'applicazione ChIP potrebbe richiedere l'ottimizzazione delle condizioni di reticolazione e frammentazione della cromatina; testare diversi metodi di frammentazione (es. sonificazione o digestione enzimatica) per ottenere frammenti di cromatina di 200–500 bp.
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione (IP) e ELISA, includere controlli positivi e negativi appropriati, come lisati di linee cellulari note per esprimere POLR2A (es. HeLa, HEK293) e mutanti difettivi nella fosforilazione, se disponibili.

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