Anticorpo policlonale coniglio Phospho-PRKCQ-T538 per WB, ELISA - Q04759

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PRKCQ

• PRKCQ (Proteina chinasi C theta tipo, nPKC-theta) è una proteina chinasi serina/treonina indipendente dal calcio, dipendente da fosfolipidi e diacilglicerolo, che svolge ruoli non ridondanti nella segnalazione del recettore delle cellule T (TCR).
• Nelle cellule T co-stimolate con TCR-CD3/CD28, è richiesta per l'attivazione di NF-kappa-B e JUN, essenziale per la produzione di IL2, e partecipa alla transattivazione di NFATC1/NFATC2. Riferimenti correlati: PMID:21964608
• Media l'attivazione della via canonica NF-kB fosforilando CARD11, portando al reclutamento del complesso BCL10-MALT1 e all'attivazione di IKK.
• PRKCQ è critica per la differenziazione delle cellule T-helper, essendo necessaria per lo sviluppo delle cellule Th2 e Th17, e svolge un ruolo minore nella risposta Th1; fornisce anche segnali di sopravvivenza fosforilando BAD e up-regolando BCL-XL.
• Oltre alle cellule T, nelle piastrine regola la trasduzione del segnale a valle di ITGA2B e altri recettori, svolgendo un ruolo positivo nella segnalazione "outside-in" e nella secrezione di granuli.
• Può mediare gli effetti inibitori degli acidi grassi liberi sulla segnalazione dell'insulina fosforilando IRS1, bloccando così l'attivazione della via PI3K/AKT.
• PRKCQ fosforila CCDC88A/GIV e inibisce la sua attività di fattore di scambio dei nucleotidi guaninici. Riferimenti correlati: PMID:23509302
• Attiva anche LRRK1, che fosforila le proteine RAB coinvolte nel traffico intracellulare. Riferimenti correlati: PMID:36040231
• Localizzazione subcellulare: Citoplasma e membrana cellulare.
• Specificità tissutale: Espressa nel muscolo scheletrico, nelle cellule T, nelle cellule megacarioblastiche e nelle piastrine.
• Le PAROLE CHIAVE indicano che è una fosfoproteina coinvolta nell'immunità e nella risposta infiammatoria, con domini a dito di zinco e domini chinasici.
• La proteina subisce splicing alternativo e possiede modifiche del legame isopeptidico e coniugazione Ubl.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Il design dell'immunogeno mira alla fosforilazione a Thr538. Per preservare questa modifica labile, includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi ed evitare cicli di congelamento-scongelamento dei campioni.
• Per il western blotting, utilizzare un agente di bloccaggio delicato (es. 5% BSA) per ridurre il legame aspecifico; confermare la specificità dell'anticorpo trattando i campioni con lambda fosfatasi prima dell'elettroforesi.
• Si consiglia la validazione in un contesto cellulare pertinente: nelle linee cellulari di cellule T umane (es. Jurkat) stimolate tramite anti-CD3/CD28, dovrebbe essere osservata una banda a ~82 kDa, indicante la fosforilazione di PRKCQ.
• Per il rilevamento basato su ELISA, un fosfopeptide che copre il sito T538 può fungere da controllo positivo; la reattività crociata con il peptide non fosforilato dovrebbe essere valutata.

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