pAb di coniglio Phospho-Raf1-S338 per WB, IHC-P, ELISA - P04049

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Raf1

• Il gene RAF1 codifica la serina/treonina protein-chinasi Raf-1 (conosciuta anche come c-RAF), un trasduttore essenziale della via di segnalazione RAS-RAF-MEK-ERK che regola proliferazione cellulare, differenziazione, apoptosi e trasformazione oncogena.
• L'attivazione di Raf1 richiede la fosforilazione alla Ser338 (e alla Ser339) da parte di PAK1, che innesca la cascata chinasi: Raf1 fosforila e attiva MEK1/2, che a loro volta fosforilano ERK1/2.
• Raf1 fosforilato (p-Ser338) fosforila anche direttamente BAD alla Ser75, inibendo la sua funzione pro-apoptotica e promuovendo la sopravvivenza cellulare.
• Raf1 è distribuito in più compartimenti cellulari — citoplasma, membrana cellulare, mitocondri e nucleo — permettendo una segnalazione dipendente dal contesto; la Raf1 mitocondriale lega BCL2 per bloccare l'apoptosi.
• Nel muscolo scheletrico, l'isoforma 1 di Raf1 è più abbondante dell'isoforma 2, suggerendo una regolazione tessuto-specifica.
• Le mutazioni nel gene RAF1 sono associate alla sindrome di Noonan e alla cardiomiopatia ipertrofica; il gene è un noto proto-oncogene frequentemente iperattivato nei tumori umani.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono la fosforilazione di serina/treonina/tirosina, metilazione e ubiquitinazione, che regolano finemente l'attività e la stabilità di Raf1.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente alla regione intorno alla Ser338; pertanto l'anticorpo riconosce specificamente Raf1 solo quando è fosforilato in questo sito. Per il western blotting, aggiungere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisati e considerare il trattamento dei campioni con EGF o siero per stimolare la fosforilazione.
• Per IHC-P, verificare la fosfo-specificità confrontando la colorazione con e senza trattamento con fosfatasi; le condizioni di recupero dell'antigene potrebbero richiedere ottimizzazione per gli epitopi fosforilati.
• Questo anticorpo è validato per WB, IHC-P e ELISA. Quando si esegue l'ELISA quantitativa, utilizzare appropriati controlli di peptide fosforilato e non fosforilato per confermare la specificità.
• Secondo i dati del fornitore, reagisce in modalità crociata con Raf1 di uomo, topo e ratto; validare nel sistema di campioni desiderato per garantire prestazioni coerenti.

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