Anticorpo policlonale di coniglio anti-Phospho-SHC1-Y427 - P29353

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di SHC1

• SHC1 codifica tre isoforme principali—p46Shc, p52Shc e p66Shc—generate da splicing alternativo e dall'uso di promotori alternativi.
• Le isoforme p46Shc e p52Shc accoppiano i recettori tirosin-chinasici attivati alla via di segnalazione Ras reclutando il complesso GRB2/SOS, propagando così i segnali mitogenici.
• L'isoforma p66Shc non è coinvolta nell'attivazione di Ras, ma media le risposte allo stress ossidativo e l'apoptosi; agisce a valle di p53 per aumentare gli ossidanti intracellulari e il rilascio di citocromo c.
• SHC1 partecipa alla segnalazione del recettore dell'angiopoietina TEK/TIE2, regolando la migrazione delle cellule endoteliali e l'angiogenesi per gemmazione.
• È coinvolto nella segnalazione mediata da oncostatina-M attraverso il recettore OSM di tipo II, contribuendo all'attivazione della via Ras/Raf/MAPK tramite il reclutamento dipendente da JAK1 alla subunità OSMR e l'associazione di SHC1 con GRB2. Riferimenti correlati: PMID:11016927
• SHC1 si localizza nel citoplasma, nelle adesioni focali e nella matrice mitocondriale, riflettendo i suoi diversi ruoli di segnalazione.
• La proteina è ampiamente espressa, in particolare nelle cellule staminali neurali, ma è assente nei neuroni maturi.
• Le principali modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione (è una fosfoproteina) e l'acetilazione; contiene un dominio SH2 essenziale per le interazioni proteina-proteina.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico attorno alla Y427, che consente il rilevamento specifico della fosforilazione in questo residuo. Per il Western blot, considerare l'utilizzo di controlli fosfo-specifici e di proteina totale per confermare l'identità della banda.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo in linee cellulari umane o murine pertinenti stimolate con fattori di crescita appropriati (es. EGF, PDGF) per indurre la fosforilazione di SHC1.
• Per l'ELISA, confermare la specificità mediante inibizione competitiva con il peptide fosforilato rispetto a quello non fosforilato.
• Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo primario e le condizioni di blocco; una diluizione iniziale tipica per WB potrebbe essere 1:500–1:2000, ma si raccomanda una determinazione empirica nel proprio sistema.
• Poiché SHC1 è coinvolto in molteplici cascate di segnalazione, interpretare i risultati nel contesto dell'intera via e dei potenziali meccanismi di feedback.

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