Fosfo-Smad2 (S245/S250/S255) Anticorpo monoclonale di coniglio per WB ed ELISA - Q15796

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di SMAD2

• SMAD2 (Madri contro l'omologo 2 di decapentaplegico) è una SMAD regolata dal recettore (R-SMAD) che funge da trasduttore di segnale intracellulare e modulatore trascrizionale per le chinasi del recettore di tipo 1 del TGF-beta (fattore di crescita trasformante) e dell'activina.
• Dopo la fosforilazione al suo motivo SXS C-terminale (residui di serina 465 e 467), SMAD2 forma un complesso con SMAD4 e si trasloca nel nucleo dove si lega all'elemento responsivo al TGF-beta (TRE) nei promotori dei geni bersaglio per regolare la trascrizione.
• SMAD2 regola positivamente l'attività chinasica di PDPK1 stimolandone la dissociazione dalla proteina inibitoria 14-3-3 YWHAQ.
• È stato implicato come soppressore tumorale nel carcinoma del colon-retto. Riferimenti correlati: PMID:8752209
• Subcellulare, SMAD2 fa la spola tra il citoplasma e il nucleo, in linea con il suo ruolo nella trasduzione del segnale.
• La proteina è espressa ad alti livelli nel muscolo scheletrico, nelle cellule endoteliali, nel cuore e nella placenta.
• Le modificazioni post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, che ne regolano l'attività, la stabilità e le interazioni.
• Lo splicing alternativo genera più isoforme e la proteina contiene un dominio di legame per ioni zinco (dominio MH1) che media il legame al DNA.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• Questo anticorpo è stato generato contro un peptide fosforilato; i buffer di lisi del campione dovrebbero includere inibitori delle fosfatasi (es. ortovanadato di sodio, fluoruro di sodio) per mantenere lo stato di fosforilazione durante la preparazione.
• Per il Western blotting, considerare di eseguire sia lisati cellulari non trattati che stimolati con TGF-β/activina per confermare gli shift di banda dipendenti dall'attivazione.
• Una diluizione iniziale consigliata per il WB è 1:500–1:2000, ma la concentrazione ottimale dovrebbe essere determinata empiricamente nel vostro specifico sistema di campionamento.
• In ELISA, l'uso di un buffer di blocco con bassa attività fosfatasica può ridurre il fondo; considerare un saggio competitivo con fosfo-peptide per verificare la specificità.
• Essendo un anticorpo monoclonale di coniglio, utilizzare un anticorpo secondario anti-IgG di coniglio (H+L) coniugato con HRP o AP per la rilevazione.

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