Anticorpo policlonale coniglio Phospho-Smad2-S465/467 + Smad3-S423/425 per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q15796 / P84022

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di SMAD2 e SMAD3

• SMAD2 è una SMAD regolata dal recettore (R-SMAD) che agisce come trasduttore di segnale intracellulare per le vie TGF-beta e activina.
• Dopo il legame con il ligando, le chinasi del recettore di tipo 1 fosforilano SMAD2 sul motivo C-terminale SSXS (Ser465 e Ser467), innescando la sua attivazione, la formazione del complesso con SMAD4 e la traslocazione nucleare.
• Nel nucleo, il complesso SMAD2/SMAD4 si lega all'elemento responsivo al TGF-beta (TRE) nei promotori dei geni bersaglio e regola la trascrizione.
• SMAD2 può funzionare come oncosoppressore nel carcinoma del colon-retto. Riferimenti correlati: PMID:8752209
• È altamente espresso nel muscolo scheletrico, nelle cellule endoteliali, nel cuore e nella placenta.
• SMAD3 è un omologo stretto di SMAD2 e condivide meccanismi di attivazione simili. L'anticorpo rileva la fosforilazione nei siti corrispondenti Ser423/425 in SMAD3.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione; SMAD2 contiene anche un sito di legame per lo zinco.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico rivolto al motivo di doppia fosforilazione, che garantisce specificità per le forme attivate di SMAD2 e SMAD3. Verificare la fosfo-specificità utilizzando campioni trattati con fosfatasi.
• Per Western blot, includere inibitori di fosfatasi durante la lisi per preservare la fosforilazione e valutare l'utilizzo di campioni freschi. I pesi molecolari previsti di SMAD2 e SMAD3 sono intorno a 48-52 kDa, ma possono apparire più bande a causa della fosforilazione e delle isoforme.
• Per immunofluorescenza e immunoistochimica, la fissazione standard con PFA al 4% e permeabilizzazione con Triton X-100 può essere adatta; ottimizzare il recupero dell'antigene per IHC-P.
• L'ELISA può essere utilizzata per lo screening ad alto rendimento dell'attivazione della via TGF-beta; è consigliabile un test di reazione crociata per studi su più specie.
• Includere sempre controlli positivi e negativi appropriati (ad es. cellule trattate con TGF-beta vs cellule non trattate) per confermare la fosfo-specificità.

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