mAb coniglio contro Phospho-Smad2-S465/S467 + Smad3-S423/S425 per WB, ELISA - Q15796/P84022

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMAD2

• SMAD2 (Mothers against decapentaplegic homolog 2), noto anche come MADH2 o MADR2, è un SMAD regolato dal recettore (R-SMAD) che funge da trasduttore di segnale intracellulare per le chinasi del recettore di tipo 1 TGF-beta e activina.
• Dopo il legame con il ligando, SMAD2 viene fosforilato sui residui di serina C-terminali S465/S467, portando alla formazione di un complesso con SMAD4 e alla traslocazione nucleare: nel nucleo lega gli elementi TRE per regolare la trascrizione genica.
• Modula positivamente l'attività della chinasi PDPK1 promuovendo la dissociazione dalla proteina 14-3-3 YWHAQ, un importante regolatore negativo.
• SMAD2 può esercitare la funzione di oncosoppressore nel carcinoma colorettale. Riferimenti correlati: PMID:8752209
• Subcellularmente, SMAD2 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, con un traffico dinamico controllato dallo stato di fosforilazione.
• L'espressione tissutale è particolarmente evidente nel muscolo scheletrico, nelle cellule endoteliali, nel cuore e nella placenta.
• Modifiche post-traduzionali come fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione regolano finemente l'attività e la stabilità di SMAD2.
• Questo anticorpo rileva la doppia fosforilazione in S465/S467 di SMAD2 e le siti omologhi S423/S425 di SMAD3, entrambi critici per l'attivazione nella trasduzione del segnale TGF-beta.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'anticorpo monoclonale di coniglio è stato prodotto contro un fosfopeptide sintetico che circonda S465/S467 di SMAD2 umano, garantendo la specificità per lo stato fosforilato attivato.
• Per Western blotting, aggiungere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisì per preservare la fosforilazione della proteina bersaglio. Le bande principali attese sono ~52 kDa (SMAD2) e ~48 kDa (SMAD3); bande aggiuntive a ~25, 35 e 43 kDa possono rappresentare prodotti di clivaggio o isoforme. Verificare la specificità con controlli trattati con fosfatasi o silenziamento mediante siRNA.
• Per ELISA, si consiglia di normalizzare il segnale fosforilato sui livelli totali di SMAD2/3 utilizzando un anticorpo pan; ottimizzare empiricamente le condizioni sperimentali.
• È stata osservata reattività incrociata con proteine umane, murine e di ratto; confermare i livelli di fosforilazione endogena nel vostro sistema sperimentale con un'adeguata stimolazione TGF-beta.

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