Anticorpo Monoclonale Coniglio Phospho-Smad5 (S463/S465) per WB, ELISA - Q99717

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Smad5

• SMAD5 (Mothers against decapentaplegic homolog 5, noto anche come JV5-1, MADH5) è un regolatore della trascrizione appartenente alla famiglia SMAD. Gioca ruoli essenziali nello sviluppo embrionale, nella differenziazione cellulare, nell'angiogenesi e nell'omeostasi tissutale. Riferimenti correlati: PMID:12064918 PMID:16516194

• Upon BMP ligand stimulation, SMAD5 is phosphorylated at Ser463 and Ser465 by activated type I BMP receptors. This phosphorylation promotes its association with SMAD4 to form a heteromeric complex that translocates to the nucleus, where it regulates gene expression by binding to Smad Binding Elements (SBEs) in promoter regions. Riferimenti correlati: PMID:9442019 PMID:33510867

• In addition to its transcription factor role, non-phosphorylated SMAD5 functions in the cytoplasm to regulate energy metabolism. It enhances mitochondrial respiration and glycolysis by interacting with hexokinase 1 (HK1), thereby accelerating glycolysis in response to cytoplasmic pH changes. Riferimenti correlati: PMID:28675158

• La proteina si localizza nel citoplasma, nel nucleo e nel mitocondrio, riflettendo i suoi diversi ruoli nella segnalazione e nel metabolismo.

• SMAD5 è espresso espressamente, coerentemente con il suo diffuso coinvolgimento nei processi cellulari fondamentali.

• Le principali modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione a S463/S465 (critica per l'attivazione) e l'acetilazione. La proteina contiene domini di legame allo zinco ed è stata confermata dal sequenziamento diretto delle proteine.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico che copre il sito di doppia fosforilazione (S463/S465). Considerare l'utilizzo di controlli di blocco con peptide non fosforilato per confermare la specificità della fosforilazione nel Western blot.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è 52 kDa. Validare la banda in linee cellulari umane rilevanti trattate con ligandi BMP per indurre la fosforilazione di Smad5. Lisati non trattati o trattati con fosfatasi possono servire come controlli negativi.
• Nelle applicazioni ELISA, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di lavoro ottimale. Le piastre rivestite con fosfo-peptide possono migliorare la specificità.
• Dato che SMAD5 è ubiquitario, assicurarsi che la preparazione del campione e i controlli di carico siano coerenti tra i tessuti o i tipi cellulari.

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