pAb di coniglio Phospho-SMO-S616 - Q99835

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della proteina smoothened

• La proteina smoothened (SMO), nota anche come proteina Gx, è un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che agisce come trasduttore centrale della via di segnalazione di hedgehog, essenziale per lo sviluppo embrionale e implicato nel cancro. Riferimenti correlati: PMID:19592253, PMID:27437577, PMID:28344083
• SMO viene attivato dal legame del colesterolo dopo la stimolazione con ligando di hedgehog, portando all'inibizione mediata dalla proteina G G(i) dell'adenilato ciclasi e alla riduzione dei livelli di cAMP, che a loro volta rilasciano i fattori di trascrizione GLI per regolare l'espressione genica target. Riferimenti correlati: PMID:28344083, PMID:31168089
• Oltre alla modulazione canonica dell'cAMP, SMO attivo sequestra e inibisce direttamente la subunità catalitica della proteina chinasi A (PKA) PRKACA sulla membrana cellulare, prevenendo la fosforilazione e il processamento dei fattori di trascrizione GLI. Riferimenti correlati: PMID:36202993, PMID:39138140
• SMO facilita anche la rimozione di GPR161, un regolatore negativo chiave, dal ciglio primario, garantendo una robusta attivazione della via (per similarità). SMO si localizza sulla membrana cellulare ed è arricchito nella membrana del ciglio primario, una nicchia subcellulare fondamentale per la trasduzione del segnale.
• La proteina subisce modifiche post-traduzionali tramite fosforilazione (inclusa quella alla Serina 616), glicosilazione, lipidazione (legame al colesterolo) e formazione di legami disolfuro, come indicato dalle parole chiave di UniProt, ed è classificata come recettore transmembrana coinvolto nella segnalazione dello sviluppo.
• La disfunzione di SMO è associata a malattie dello sviluppo e cancro; la sua attività è strettamente regolata dall'inibitore a monte patched (PTCH1/2) e dall'accesso al colesterolo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico che corrisponde alla regione della Serina 616 di SMO umana, che garantisce la specificità per la forma fosforilata; la reattività incrociata con la forma non fosforilata deve essere valutata nei controlli negativi.
• Per Western blot (WB), è prevista una banda intorno agli 86 kDa; ottimizzare il bloccaggio e la diluizione dell'anticorpo per ridurre il background dovuto all'espressione endogena di SMO.
• In ELISA e dot blot (DB), utilizzare il peptide fosforilato come controllo positivo e il peptide non fosforilato per confermare la specificità per la fosforilazione; per la convalida, si consiglia di effettuare saggi di competizione peptidica.
• Dato che SMO si localizza nei ciglia, l'immunorilevazione nei lisati di cellule intere può essere complessa; per studi sulla localizzazione ciliare, prendere in considerazione strategie di arricchimento o l'immunofluorescenza.
• L'anticorpo ha reattività incrociata con SMO umano; per altre specie, verificare l'omologia della sequenza nel sito di fosforilazione prima dell'uso.

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