Fosfo-Src-Y529 coniglio pAb per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P12931

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di Src

• La tirosina-proteina chinasi proto-oncogenica Src (c-Src) è una chinasi tirosinica non recettoriale di ~60 kDa, codificata dal gene SRC (ID Gene: 6714). Nomi alternativi includono ASV, SRC1, THC6 e p60-Src. Tre isoforme derivano dallo splicing alternativo, con l'isoforma 1 che rappresenta la sequenza canonica.
• Src media la trasduzione del segnale da diversi tipi di recettori (immunitari, integrina, fattore di crescita, GPCR), controllando la trascrizione genica, la risposta immunitaria, l'adesione cellulare, la progressione del ciclo, l'apoptosi, la migrazione e la trasformazione (PubMed:34234773, PubMed:21411625). Riferimenti correlati: PMID:34234773, PMID:21411625
• Attraverso la fosforilazione di substrati come AFAP1, cortactina (CTTN), FAK (PTK2) e paxillina, Src orchestra la riorganizzazione del citoscheletro, la dinamica delle adesion focali e la segnalazione delle giunzioni cellula-cellula.
• Src si localizza alla membrana cellulare, alla membrana interna mitocondriale, al nucleo, al citoplasma, al citoscheletro e alle giunzioni cellulari, consentendo una segnalazione spazialmente limitata.
• L'anticorpo riconosce specificamente Src fosforilata a Tyr529, un residuo conservato nella coda C-terminale la cui fosforilazione da parte della chinasi Csk mantiene la conformazione chiusa autoinibita. La defosforilazione o lo spostamento dell'interazione pTyr529–SH2 predispone Src all'attivazione.
• L'espressione di Src è ubiquitaria; tuttavia, le piastrine, i neuroni e gli osteoclasti mostrano livelli 5-200 volte superiori rispetto alla maggior parte degli altri tessuti. L'espressione è stata rilevata anche nella pelle (PubMed:22294297). Riferimenti correlati: PMID:22294297
• Negli osteoclasti, Src è essenziale per il riassorbimento osseo, agendo attraverso un complesso PTK2B/PYK2 e fosforilando CBL per attivare la segnalazione PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Promuove anche la produzione di energia attivando il citocromo c ossidasi (PubMed:12615910). Riferimenti correlati: PMID:14585963, PMID:8755529, PMID:12615910
• Src partecipa all'immunità innata antivirale potenziando la segnalazione mediata da RIG-I (PubMed:19419966) e media la rigenerazione epiteliale guidata da IL6 attraverso la via YAP1-NOTCH (PubMed:25731159). Riferimenti correlati: PMID:19419966, PMID:25731159

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente alla regione Y529; assicurarsi che la preparazione del campione preservi la fosforilazione (utilizzare inibitori delle fosfatasi) e includere controlli non fosforilati per verificare la specificità.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto di Src è di ~60 kDa; dovrebbe essere osservata una banda di questa dimensione. Considerare l'uso del blocco con BSA al 5% per ridurre il legame non specifico.
• In IHC-P e IF/ICC, i metodi di recupero dell'antigene possono influenzare la conservazione dell'epitopo fosforilato; si raccomanda un recupero delicato basato su citrato e il trattamento a bassa temperatura.
• Il rilevamento ELISA di fosfo-Src-Y529 può essere utilizzato in combinazione con anticorpi Src totali per valutare i livelli di fosforilazione specifica del sito nei lisati cellulari.
• È prevista la reattività crociata con Src di topo e ratto in base all'omologia di sequenza; convalidare nel sistema di campione pertinente.

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