Anticorpo Monoclonale di Coniglio Anti-Phospho-Ubiquitina (Ser65) per WB, IF/ICC, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'Ubiquitina

• L'ubiquitina è una proteina altamente conservata di 76 amminoacidi, spesso espressa come proteina di fusione con la proteina ribosomiale eS31 (gene RPS27A) e clivata per generare ubiquitina libera e il componente ribosomiale.
• L'ubiquitina può essere coniugata alle proteine bersaglio tramite legami isopeptidici, formando monomeri o catene poliubiquitiniche legate attraverso diversi residui di lisina; le catene legate a Lys-48 indirizzano le proteine alla degradazione proteasomiale, mentre quelle legate a Lys-63 mediano l'endocitosi, la riparazione del DNA e la segnalazione di NF-κB.
• Come parte della subunità ribosomiale 40S, la proteina di fusione ubiquitina-ribosomiale partecipa alla biogenesi dei ribosomi e all'elaborazione del pre-rRNA all'interno del nucleolo. Riferimenti correlati: PMID:9582194, PMID:23636399, PMID:34516797
• L'ubiquitina subisce varie modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione e ADP-ribosilazione, che ne modulano le funzioni cellulari.
• La proteina di fusione agisce anche come proteina ribosomiale legante lo zinco, contenente un motivo dita di zinco di tipo C4.
• La localizzazione subcellulare include il citoplasma, il nucleo e il nucleolo, in linea con i ruoli sia nella degradazione proteica citosolica che nell'assemblaggio ribosomiale nucleare.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• A causa della natura labile della fosforilazione, includere inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare l'epitopo fosfo-Ser65.
• Verificare la specificità dell'anticorpo mediante trattamento dei lisati con fosfatasi o competendo con un peptide non fosforilato.
• Possono essere rilevate bande multiple perché l'ubiquitina è coniugata a numerose proteine bersaglio; i pesi molecolari previsti includono l'ubiquitina libera (~8.5 kDa) e coniugati di peso molecolare più elevato (bande osservate a ~15, 18, 26 e 77 kDa).
• Per l'immunofluorescenza, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per mantenere il segnale di fosforilazione.

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