Phospho-Vimentin-S56 Rabbit pAb per WB, ELISA - P08670

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Vimentina

• La Vimentina è una proteina del filamento intermedio di tipo III codificata dal gene VIM, prevalentemente espressa nelle cellule mesenchimali e ampiamente utilizzata come marcatore della transizione epiteliale-mesenchimale (TEM).
• I filamenti di vimentina collegano il nucleo, il reticolo endoplasmatico e i mitocondri, svolgendo un ruolo chiave nel mantenimento della citoarchitettura e facilitando il posizionamento degli organelli durante la migrazione cellulare direzionale.
• La vimentina interagisce con LARP6 per stabilizzare gli mRNA del collagene di tipo I (COL1A1 e COL1A2), contribuendo alla produzione della matrice extracellulare e alla fibrosi tissutale.
• La proteina subisce estese modifiche post-traduzionali tra cui fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione; la fosforilazione a Ser-56 (il bersaglio di questo anticorpo) è implicata nella regolazione della dinamica di assemblaggio/disassemblaggio dei filamenti.
• La localizzazione subcellulare è principalmente citoplasmatica e del citoscheletro, con pool aggiuntivi nella matrice nucleare, nella membrana cellulare e negli assoni neuronali, riflettendo i suoi diversi ruoli funzionali.
• L'espressione tissutale è elevata nei fibroblasti e in determinate cellule immunitarie, con livelli variabili nelle linee cellulari tumorali; la vimentina è frequentemente up-regolata nei tumori metastatici e di origine mesenchimale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Includere sempre inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi durante la preparazione del campione per preservare il segnale di fosforilazione S56.
• Validare la specificità dell'anticorpo trattando i campioni con λ-fosfatasi o utilizzando controlli positivi con inibitori delle fosfatasi; la perdita del segnale dopo defosforilazione conferma la fosfo-specificità.
• Per il Western blot, eseguire un gel SDS-PAGE riducente e trasferire su membrana PVDF o nitrocellulosa; la banda prevista è di ~54 kDa (può spostarsi leggermente a seconda dello stato di fosforilazione).
• Questo anticorpo è adatto anche per ELISA; ottimizzare le condizioni di rivestimento e i reagenti di rilevamento in base al formato specifico del saggio.
• La reattività incrociata è riportata per umano e ratto; se si utilizzano altre specie, eseguire la validazione interna a causa di potenziali variazioni della sequenza attorno al sito di fosforilazione.

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