mAb di coniglio anti-PKC alfa per IF/ICC, ELISA - P17252

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione della proteina chinasi C tipo alfa

• La proteina chinasi C tipo alfa (PKCα), codificata dal gene PRKCA (alias: PKCA, PRKACA), è una serina/treonina-proteina chinasi attivata dal calcio e dipendente da fosfolipidi e diacilglicerolo (DAG). Appartiene alla famiglia delle chinasi PKC, che svolgono ruoli chiave in diverse vie di trasduzione del segnale.
• La PKCα è coinvolta nella regolazione positiva e negativa della proliferazione cellulare, apoptosi, differenziazione, migrazione, adesione, tumorigenesi, ipertrofia cardiaca, angiogenesi, funzione piastrinica e infiammazione. Fosforila direttamente bersagli come RAF1, BCL2, CSPG4, TNNT2/CTNT e attiva le cascate di segnalazione MAPK/ERK e RAP1GAP.
• Nella biologia del cancro, la PKCα è altamente espressa in vari tumori, inclusi gliomi e tumori al seno, dove può agire come promotore tumorale. Esibisce funzioni anti-apoptotiche sopprimendo l'attivazione di IGFBP3 mediata da p53 e fosforilando BCL2. Nelle cellule di glioma, promuove la crescita cellulare tramite RAF1/MAPK/ERK.
• La PKCα regola la dinamica del citoscheletro e la migrazione cellulare. Ad esempio, fosforila CSPG4, inducendo la formazione di lamellipodi e la polarizzazione cellulare. Durante la migrazione dei linfociti T CD4+ indotta da chemochine, la PKCα fosforila DOCK8, portando all'attivazione di CDC42 e a una maggiore motilità. Riferimenti correlati: PMID:28028151
• La localizzazione subcellulare della PKCα è dinamica: essa naviga tra citoplasma, membrana cellulare, membrana mitocondriale e nucleo, a seconda dello stimolo. Questo traffico è critico per le sue funzioni di segnalazione in processi come la differenziazione dei macrofagi e la guarigione delle ferite.
• Nel sistema cardiovascolare, la PKCα regola negativamente la contrattilità miocardica fosforilando la troponina T cardiaca (TNNT2/CTNT), il che riduce l'attività dell'ATPasi actomiosinica e la sensibilità al calcio. Promuove anche l'ipertrofia cardiaca attraverso la segnalazione MAPK/ERK ed è essenziale per l'angiogenesi, mediando la migrazione delle cellule endoteliali e la segnalazione dipendente da VEGFA.
• La PKCα è soggetta a modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione e acetilazione, che ne modulano l'attività e le interazioni. È anche un proto-oncogene e una voce del proteoma di riferimento (parole chiave UniProt: Acetilazione, Apoptosi, Legame ATP, Calcio, Adesione cellulare, Membrana cellulare, Citoplasma, Sequenziamento diretto di proteine, Chinasi, Membrana, Legame metallico, Mitocondrio, Legame nucleotidico, Nucleo, Fosfoproteina, Identificazione proteomica, Proto-oncogene, Proteoma di riferimento, Ripetizione, Serina/treonina-proteina chinasi, Transferasi, Zinco, Dito di zinco).
• La PKCα fosforila KLHL3 in risposta all'angiotensina II, influenzando la segnalazione WNK4 e l'omeostasi ionica. Attiva anche LRRK1, che poi fosforila le proteine RAB per regolare il traffico intracellulare. Riferimenti correlati: PMID:25313067 PMID:36040231

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato è la proteina PKC alfa umana ricombinante. Questo design produce tipicamente anticorpi che riconoscono le conformazioni proteiche native. Per IF/ICC, considerare l'ottimizzazione delle condizioni di fissazione/permeabilizzazione per preservare la localizzazione subcellulare del bersaglio (citoplasma, membrana, nucleo).
• Per l'ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per rilevare PKCα in lisati cellulari o campioni di proteine purificate. Accoppiarlo con un sistema di rilevamento adatto e validare nel sistema di campioni pertinente per garantire la specificità.
• L'attivazione di PKCα comporta spesso la traslocazione; pertanto, negli esperimenti IF/ICC, la stimolazione con agonisti come il PMA può rivelare modelli di ridistribuzione dinamica. Includere sempre controlli appropriati.
• La reattività crociata è riportata per l'uomo; verificare la reattività con altre specie se necessario.

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