PLOD3 Rabbit mAb - O60568

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PLOD3

• Identità e funzione della proteina: PLOD3, noto anche come LH3 (lisil idrossilasi 3), è un enzima multifunzionale che esegue critiche modifiche post-traduzionali sui residui di lisina del collagene.
• Attività idrossilasi: Catalizza l'idrossilazione della lisina nei motivi -Xaa-Lys-Gly- dei procollageni, generando idrossilisina. Questo passaggio è essenziale per la stabilità termica del collagene e la formazione dei ponti crociati. Riferimenti correlati: PMID:11956192, PMID:12475640, PMID:18298658
• Attività glicosiltransferasi: A seguito dell'idrossilazione, l'enzima aggiunge sequenzialmente galattosio e glucosio all'idrossilisina, formando 1,2-glucosilgalattosil-5-idrossilisina. Questi eventi di glicosilazione sono indispensabili per la secrezione del collagene di tipo IV, l'assemblaggio della membrana basale e si verificano anche sul dominio simile al collagene di MBL1. Riferimenti correlati: PMID:12475640, PMID:18298658, PMID:18834968, PMID:10934207, PMID:11896059, PMID:11956192, PMID:25419660
• Localizzazione subcellulare: PLOD3 risiede prevalentemente nel lume e nella membrana del reticolo endoplasmatico rugoso (RER), con una minoranza secreta nello spazio extracellulare. Ciò è coerente con il suo ruolo nel processamento del collagene all'interno della via secretoria.
• Distribuzione tissutale: Espresso ubiquitariamente, con i livelli più alti nel cuore, nella placenta e nel pancreas, e livelli inferiori nel polmone, nel fegato e nel muscolo scheletrico. Riferimenti correlati: PMID:9582318, PMID:9724729
• Requisiti dei cofattori: Il dominio idrossilasi dipende da Fe²⁺, 2-ossoglutarato, O₂ e ascorbato (vitamina C), mentre le attività glicosiltransferasi richiedono probabilmente Mn²⁺.
• Caratteristiche strutturali: L'enzima è esso stesso una glicoproteina con legami disolfuro intramolecolari.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Western blotting: In condizioni riducenti e denaturanti, dovrebbe essere osservata una banda specifica a circa 85 kDa. Utilizzare un appropriato carico proteico e validare con una linea cellulare o un lisato tissutale rilevante che esprima PLOD3.
• Immunochimica (paraffina): Si raccomanda il recupero standard dell'antigene (ad es. tampone citrato, pH 6.0) e i passaggi di blocco. Si consiglia l'ottimizzazione della concentrazione dell'anticorpo primario e del sistema di rilevamento.
• ELISA: L'anticorpo può essere utilizzato in formati ELISA diretti o di cattura. Dovrebbe essere eseguita la titolazione sia dell'antigene di rivestimento che della concentrazione dell'anticorpo per determinare le condizioni ottimali.
• Considerazioni sull'immunogeno: Questo anticorpo è stato prodotto contro una proteina ricombinante che copre gli amminoacidi 25–306 (regione N-terminale). Può rilevare sia PLOD3 a lunghezza intera che potenziali frammenti N-terminali.

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