Anticorpo monoclonale coniugato di coniglio anti-Calreticulina umana per FC (intra) - P27797

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Calreticulina

• La calreticulina è una chaperone legante il calcio altamente conservata, conosciuta anche come CRP55, Calregulina, ERp60, HACBP o grp60. È il prodotto del gene CALR nell'uomo (ID genico: 811).
• Nel reticolo endoplasmatico, la calreticulina agisce come chaperone di tipo lectinico che promuove il ripiegamento, l'assemblaggio oligomerico e il controllo qualitativo delle glicoproteine nascenti attraverso il ciclo calreticulina/calnexina. Interagisce transitoriamente con quasi tutte le glicoproteine monoglicosilate sintetizzate nel RE. Riferimenti bibliografici: PMID:7876246
• Al di fuori del reticolo endoplasmatico, la calreticulina interagisce con il dominio di legame al DNA del recettore nucleare NR3C1 e media la sua esportazione nucleare, collegando la proteina alla regolazione trascrizionale. Riferimenti bibliografici: PMID:11149926
• La calreticulina è implicata nella biologia riproduttiva, dove partecipa alla regolazione dell'espressione genica materna e può contribuire alla maturazione degli oociti attraverso l'omeostasi del calcio. Negli oociti non attivati è presente nei granuli corticali e viene esocitata durante la reazione corticale per contribuire a prevenire la polispermia.
• Subcellularmente, la calreticulina si trova prevalentemente nel lume del reticolo endoplasmatico, ma può localizzarsi anche nel citosol, nello spazio extracellulare, sulla superficie cellulare, nel reticolo sarcoplasmatico e nelle vescicole secretorie come i granuli corticali e citolitici.
• La proteina subisce diverse modifiche post-traduzionali tra cui acetilazione, idrossilazione e formazione di legami disolfuro. Presenta un peptide segnale, motivi ripetuti ed è classificata in diverse categorie: chaperone, calcio, legante metalli (zinco), glicoproteina, lectina e altro.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli aminoacidi 335–417 della calreticulina umana, una regione C-terminale distinta dal peptide segnale N-terminale e dai domini chaperone. Questo progetto permette di rilevare la calreticulina totale indipendentemente dallo stato di ritenzione nel RE o di secrezione.
• Poiché la calreticulina risiede principalmente nel lume del reticolo endoplasmatico, la citometria a flusso intracellulare (FC intra) richiede fissazione e permeabilizzazione cellulare. Ottimizzare le condizioni di permeabilizzazione (ad esempio con saponina o metanolo) per garantire l'accesso dell'anticorpo preservando la reattività dell'epitopo.
• è un fluoroforo nel rosso lontano che permette il multiplexing con altri marcatori intracellulari minimizzando la sovrapposizione spettrale. Eseguire la titolazione dell'anticorpo per determinare il rapporto segnale-rumore ottimale per il vostro sistema sperimentale specifico.
• Si consiglia di utilizzare questo anticorpo per studiare lo stress del reticolo endoplasmatico, le dinamiche del controllo qualitativo delle proteine o gli eventi di traslocazione della calreticulina in modelli cellulari umani. Come per ogni colorazione intracellulare, includere controlli appropriati (cellule non stimolate, controlli isotipici e controllo "fluorescenza meno uno") per convalidare la specificità.

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