Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD146 umano per FC - P43121

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD146

• Il CD146, indicato anche come MUC18 o MCAM, è una glicoproteina di superficie cellulare appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, codificata dal gene MCAM (GeneID: 4162). Lo splicing alternativo produce molteplici isoforme.
• Media l'adesione cellulare calcio-indipendente e contribuisce all'integrità del monostrato endoteliale nelle giunzioni intercellulari del tessuto vascolare.
• Nel melanoma, si ritiene che l'espressione di CD146 consenta alle cellule tumorali di interagire con l'endotelio vascolare, promuovendo così la disseminazione ematogena e le metastasi.
• La proteina funge da recettore di superficie e l'interazione con il ligando innesca la fosforilazione della tirosina di FYN e PTK2/FAK1, insieme a un aumento transitorio dei livelli di calcio intracellulare.
• Durante l'embriogenesi, il CD146 può agire come molecola di adesione guidando la migrazione delle cellule della cresta neurale.
• Gli studi di immunolocalizzazione mostrano il CD146 sulla membrana plasmatica; la sua regione extracellulare contiene domini simili alle immunoglobuline, siti di glicosilazione N-linked e ponti disolfuro, mentre la coda citoplasmatica subisce fosforilazione.
• Il peso molecolare previsto è di circa 71,6 kDa; tuttavia, la proteina glicosilata matura migra come una banda da 57–71 kDa in SDS-PAGE.
• Nei tessuti adulti normali, il CD146 è limitato alle cellule muscolari lisce e alle cellule endoteliali, ma è fortemente sovraespresso nei melanomi primari avanzati e nelle lesioni metastatiche, rendendolo un marcatore di progressione tumorale.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno (aa 24-559) copre l'intero dominio extracellulare del CD146 umano, pertanto si prevede che questo anticorpo riconosca la proteina nativa di superficie cellulare in cellule vive e non fissate: un requisito fondamentale per le applicazioni di citometria a flusso.
• Titolare l'anticorpo nel saggio di citometria a flusso per stabilire una concentrazione ottimale che produca una chiara separazione tra popolazioni positive e negative.
• Includere sempre controlli isotipici appropriati, controlli di compensazione a singolo colore e un colorante di vitalità per escludere le cellule morte dall'analisi.
• Convalidare la colorazione in linee cellulari ben caratterizzate che esprimono CD146 (ad esempio, melanoma A375) o in campioni di tumore primario noti per sovraesprimere MCAM.
• Poiché è un fluoroforo fotosensibile, conservare il coniugato al riparo dalla luce, evitare cicli di congelamento-scongelamento ripetuti e centrifugare brevemente prima di ogni utilizzo per rimuovere gli aggregati.

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