Anticorpo monoclonale coniglio anti-umano CD16b per citometria a flusso - O75015

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Recettore III-B per la regione Fc delle immunoglobuline gamma a bassa affinità (CD16b) Funzione e localizzazione

• Il CD16b (FCGR3B) è un recettore a bassa affinità per la regione Fc delle immunoglobuline gamma (IgG) e si lega sia alle IgG complessate/aggregate che a quelle monomeriche. A differenza del suo paralogo CD16a (FCGR3A), non media la citotossicità cellulare dipendente da anticorpi (ADCC) o la fagocitosi.
• Può funzionare come trappola per i complessi immunitari circolanti, impedendo l'attivazione dei neutrofili e aiutando a rimuovere gli aggregati IgG-antigene dalla circolazione periferica.
• La proteina è espressa specificamente sui leucociti polimorfonucleati (neutrofili) e anche sugli eosinofili stimolati, distinguendola dal più ampio pattern di espressione del CD16a.
• Il CD16b è un prodotto di splicing alternativo del gene FCGR3B; è ancorato alla membrana tramite un gruppo glicosilfosfatidilinositolo (GPI) e privo di dominio transmembrana.
• Oltre alla sua forma membranaria completa, può essere generata una forma secreta tramite distacco proteolitico, estendendo ulteriormente i suoi ruoli immunoregolatori.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono due domini simili alle immunoglobuline, legami disolfuro conservati e molteplici siti di N-glicosilazione critici per il legame del ligando e la stabilità.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre il dominio extracellulare (amminoacidi 20–208), mirando alla regione di legame del ligando; ci si aspetta che riconosca sia la forma legata alla membrana che quella solubile del CD16b.
• Questo anticorpo è coniugato direttamente ad , un fluoroforo rosso lontano fotostabile, ed è adatto per la citometria a flusso senza la necessità di una fase di colorazione secondaria.
• Per una colorazione ottimale di superficie cellulare, utilizzare sangue intero lavato o neutrofili purificati; la fissazione/permeabilizzazione non è richiesta a meno che non si desideri il rilevamento intracellulare o della proteina totale.
• Poiché l'espressione del CD16b è limitata ai neutrofili e agli eosinofili stimolati, includere sempre controlli di isotipo appropriati e un marcatore pan-leucocitario (es. CD45) per convalidare la specificità del tipo cellulare.
• Quando si analizza il legame del complesso immunitario, considerare il pre-blocco con siero umano o IgG purificate per minimizzare le interazioni non specifiche tramite recettori Fc diversi dal CD16b.

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