Anticorpo monoclonale coniglio anti-Umano CD228/MFI2 per citometria a flusso - P08582

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD228/MFI2

• Codificata dal gene MELTF (noto anche come MAP97, MFI2), la melanotransferrina è una glicoproteina di superficie cellulare della famiglia della transferrina. Lo splicing alternativo produce isoforme, con la proteina a lunghezza intera a ~80 kDa e una isoforma secreta a ~32 kDa.
• Funziona nell'assorbimento cellulare del ferro: lega uno ione ferrico per subunità, viene internalizzata e riciclata alla membrana plasmatica; potrebbe anche trasportare zinco.
• Identificata originariamente come antigene p97 associato al melanoma, è espressa prevalentemente nei melanomi umani, in alcuni tessuti fetali, fegato, epitelio, cordone ombelicale, placenta e dotti delle ghiandole sudoripare.
• Ancorata alla membrana cellulare tramite una porzione GPI C-terminale, agendo come trasportatore ancorato ai lipidi piuttosto che come vettore solubile.
• Le modifiche post-traduzionali includono legami disolfuro, glicosilazione e fosforilazione, come identificato dalla proteomica.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre gli aminoacidi 20-708, comprendendo quasi l'intero dominio extracellulare; verificare la reattività con CD228 nativo e ricombinante nel pannello di citometria a flusso.
• Come anticorpo coniugato direttamente, non è necessario un reagente secondario; titolare da 0,1–1 µg per milione di cellule per determinare l'indice di colorazione ottimale.
• Validare la specificità utilizzando cellule con CD228 silenziato o una linea cellulare nota come negativa; monitorare la vitalità e l'esclusione dei doppietti per evitare artefatti da cellule morenti con alta autofluorescenza.
• Le proteine ancorate GPI possono essere sensibili alla tripsina; preparare sospensioni di cellule singole con dissociazione enzimatica delicata o meccanica se si lavora con linee cellulari aderenti.

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