Anticorpo monoclonale coniglio anti-Umano CD28 per citometria a flusso - P10747

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD28

• Il CD28 è una glicoproteina di superficie specifica delle cellule T che funge da recettore costimolatorio essenziale per l'attivazione, la proliferazione, la sopravvivenza delle cellule T e il mantenimento dell'omeostasi immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:1650475 PMID:7568038
• A seguito dell'ingaggio con i suoi ligandi cognati CD80 o CD86, il CD28 amplifica i segnali del TCR e fornisce segnali intracellulari unici che riprogrammano l'espressione genica delle cellule T, portando a una proliferazione e una produzione di citochine aumentate, in particolare IL-2, sia nei subset di cellule T CD4+ che CD8+. Riferimenti correlati: PMID:12196291 PMID:24665965 PMID:35397202
• Il legame del ligando innesca il reclutamento della proteina chinasi C-teta (PRKCQ) e GRB2, attivando NF-kappa-B attraverso vie dipendenti e indipendenti da PI3K/Akt; in congiunzione con la costimolazione TCR/CD3 e CD40L, questo migliora la produzione di IL-4 e IL-10. Riferimenti correlati: PMID:21964608 PMID:24665965 PMID:7568038 PMID:8617933
• Il CD28 potenzia anche l'attivazione mediata da CD40L di NF-kappa-B e delle chinasi MAPK8 e PAK2 nelle cellule T. Riferimenti correlati: PMID:15067037
• Espresso sulla superficie cellulare delle cellule T e delle plasmacellule, il CD28 appartiene alla superfamiglia delle immunoglobuline e contiene un singolo dominio di tipo V simile a Ig, una regione transmembrana e una coda citoplasmatica che subisce fosforilazione dopo l'attivazione.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione N-legata e fosforilazione sui residui di tirosina, che sono critiche per la trasduzione del segnale.
• La proteina matura ha un peso molecolare calcolato di circa 25 kDa (25066 Da), coerente con la sua rilevazione in applicazioni di Western blotting e citometria a flusso.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'anticorpo è stato generato contro la proteina ricombinante umana CD28 a lunghezza intera (P10747). Le sue prestazioni sono state validate in citometria a flusso (FC); per altre applicazioni, gli utenti devono eseguire un'ottimizzazione individuale.
• Per la FC, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione di colorazione ottimale nel sistema di campione pertinente e includere controlli di isotipo appropriati e passaggi di blocco Fc per minimizzare il legame non specifico.
• Poiché il CD28 viene rapidamente internalizzato dopo l'attivazione, considerare di eseguire la colorazione di superficie a 4°C o di utilizzare un inibitore metabolico per prevenire l'internalizzazione indotta dal ligando se si studiano cellule T attivate.
• Confermare la specificità della destinazione pre-incubando l'anticorpo con un eccesso di proteina ricombinante CD28 per bloccare la colorazione specifica.

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