Anticorpo monoclonale coniglio contro CD326/EPCAM umano per FC - P16422

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della molecola di adesione delle cellule epiteliali

• La molecola di adesione delle cellule epiteliali (EPCAM), denominata anche CD326, è una glicoproteina transmembrana di tipo I e un membro della famiglia dei trasduttori di segnali del calcio associati ai tumori.
• Media l'adesione cellulare omofila tra cellule epiteliali intestinali (IEC) e linfociti intraepiteliali (IEL) nell'epitelio mucoso, fornendo una barriera immunologica contro le infezioni della mucosa.
• EPCAM svolge un ruolo nella proliferazione e differenziazione delle cellule staminali embrionali, sovraregolando l'espressione di FABP5, MYC e delle cicline A ed E.
• La proteina si localizza sulla membrana cellulare laterale e nelle giunzioni strette, in linea con la sua funzione adesiva.
• È altamente espressa nelle cellule staminali embrionali indifferenziate, con livelli che diminuiscono rapidamente dopo la differenziazione; è presente anche su quasi tutte le membrane delle cellule epiteliali, ma assente dalle membrane delle cellule mesodermiche e neurali.
• EPCAM è spesso sovraespressa sulla superficie degli adenocarcinomi, pertanto è classificata come antigeno tumorale e bersaglio per la diagnostica e la terapia oncologica.
• Le modificazioni post-traduzionali includono la formazione di legami disolfuro e la glicosilazione; la proteina contiene un peptide segnale e un'elica transmembrana.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno copre il dominio extracellulare (amminoacidi 24–265), il che indica che l'anticorpo bersaglia un epitopo accessibile sulla superficie cellulare, adatto per la citometria a flusso senza permeabilizzazione.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per il proprio sistema sperimentale e includere controlli di isotipo appropriati per valutare il legame aspecifico.
• Utilizzare centrifugazione a bassa velocità e risospensione delicata per mantenere la vitalità cellulare, poiché EPCAM è un antigene di superficie; evitare digestioni enzimatiche aggressive che possono clivare gli epitopi extracellulari.
• A causa della coniugazione con un fluoroforo, proteggere i campioni dalla luce e analizzarli tempestivamente per minimizzare il fotobleaching.
• Validare la reattività in linee cellulari di origine epiteliale note per esprimere EPCAM, come MCF-7 (adenocarcinoma mammario) o HT-29 (adenocarcinoma colorettale), tenendo conto che i livelli di espressione possono variare in base allo stato di differenziazione.
• Poiché EPCAM è un antigeno tumorale, considerare strategie di gating per distinguere le cellule epiteliali dalle popolazioni non epiteliali in campioni eterogenei.

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