Anticorpo monoclonale coniglio anti-umano CD33 per citometria a flusso - P20138

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD33

• L'antigene di superficie delle cellule mieloidi CD33 (Siglec-3, gp67) è un recettore transmembrana di tipo 1 appartenente alla famiglia delle lectine simili alle immunoglobuline che legano l'acido sialico (Siglec). È codificato dal gene CD33.
• CD33 media le interazioni cellula-cellula e mantiene le cellule immunitarie in stato di riposo riconoscendo e legando preferenzialmente glicani con acido sialico legati in alfa-2,3 e alfa-2,6. Riferimenti correlati: PMID:10611343, PMID:11320212, PMID:15597323, PMID:7718872
• Dopo l'aggancio al ligando (es. C1q o glicoproteine sialilate), i motivi inibitori basati sulla tirosina del recettore immunorecettore (ITIM) nella coda citoplasmatica vengono fosforilati da chinasi di tipo Src come LCK, creando siti di aggancio per le proteine tirosina fosfatasi PTPN6/SHP-1 e PTPN11/SHP-2. Riferimenti correlati: PMID:10887109, PMID:28325905, PMID:10206955, PMID:10556798
• Le fosfatasi reclutate defosforilano le molecole di segnalazione a valle, con un effetto repressivo che dipende dalla fosfoinositide 3-chinasi/PI3K. Riferimenti correlati: PMID:15597323
• CD33 è espressa prevalentemente sulla superficie delle cellule della linea monocitica e mieloide (monociti, macrofagi, granulociti) e, nel cervello, sulle cellule microgliali.
• A livello subcellulare, CD33 si localizza sulla membrana cellulare e nei perossisomi. Contiene un peptide segnale, un dominio di tipo V simile alle immunoglobuline e un'elica transmembrana.
• La proteina subisce splicing alternativo e modificazioni post-traduzionali tra cui fosforilazione, glicosilazione N-linked e formazione di legami disolfuro. Il peso molecolare previsto è di circa 39,8 kDa, ma si osservano multiple bande (25 kDa, 33 kDa, 39 kDa) a causa della diversa glicosilazione e dell'espressione di isoforme.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi 18-259) comprende l'intero dominio extracellulare della CD33 umana, favorendo il riconoscimento della forma nativa del recettore sulla superficie cellulare.
• Per la citometria a flusso, titrare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale. Utilizzare linee cellulari conosciute CD33-positive (es. THP-1, U937) o monociti del sangue periferico umano come controlli positivi.
• Il coniugato consente il rilevamento diretto senza reagenti secondari. Proteggere l'anticorpo dalla luce ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere l'intensità di fluorescenza.
• Se è necessaria una colorazione intracellulare (es. per la localizzazione perossisomale), considerare protocolli di fissazione e permeabilizzazione compatibili con il fluoroforo.

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