Anticorpo monoclonale di coniglio anti-umano CD335/NKp46 per IF/ICC e FC - O76036

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione del recettore 1 che innesca la citotossicità naturale (CD335/NKp46)

• La proteina è un recettore che innesca la citotossicità naturale (NCR1), noto anche come CD335, LY94 o NKp46. Appartiene alla superfamiglia delle immunoglobuline ed è presente in molteplici isoforme dovute allo splicing alternativo.
• Funziona come recettore di attivazione della citotossicità, potenziando la capacità delle cellule natural killer (NK) attivate di lisare le cellule tumorali.
• CD335/NKp46 è espresso selettivamente sia sulle cellule NK a riposo sia su quelle attivate, fungendo da marcatore specifico per l'identificazione delle cellule NK.
• Il recettore è una glicoproteina transmembrana di tipo I situata sulla membrana cellulare, con una regione extracellulare contenente due domini simili alle immunoglobuline.
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione N-linked e la formazione di ponti disolfuro, che contribuiscono alla sua stabilità strutturale.
• Il gene NCR1 è localizzato sul cromosoma 19 umano e codifica una proteina con un peso molecolare previsto di circa 34,5 kDa, sebbene le bande osservate possano variare a causa della glicosilazione (intervallo 21-34 kDa).

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno comprende il dominio extracellulare (aa 22-254) del CD335/NKp46 umano, esposto sulla superficie cellulare; questo design è adatto alla rilevazione del recettore nativo.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), si consiglia di utilizzare preparazioni cellulari fissate con acetone o paraformaldeide e di includere un controllo negativo privo dell'anticorpo primario per valutare il background.
• Per la citometria a flusso (FC), la coniugazione diretta con elimina la necessità di un anticorpo secondario; assicurarsi che il fluoroforo sia compatibile con le configurazioni di laser e filtri dello strumento (eccitazione/emissione simili a quelle di Alexa Fluor 594).
• Come controlli positivi devono essere utilizzate cellule che esprimono il recettore o linee cellulari NK; le PBMC umane isolate di recente possono fungere da fonte di cellule NK che esprimono CD335/NKp46 endogeno.
• A causa dell'eterogeneità della glicosilazione, nel western blot possono comparire più bande; qualora si tenti il WB, tenere presente che l'epitopo può essere denaturato da condizioni riducenti e di ebollizione.

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