Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD55 umano per citometria a flusso - P08174

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD55 (fattore di accelerazione del decadimento del complemento)

• CD55, noto anche come fattore di accelerazione del decadimento (DAF), è una proteina di membrana ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) appartenente alla famiglia dei regolatori dell'attivazione del complemento (RCA).
• Riconosce i frammenti C4b e C3b depositati sulle superfici cellulari e interferisce con la loro capacità di catalizzare la conversione di C2 e del fattore B, impedendo così la formazione delle convertasi di amplificazione C4b2a e C3bBb. Riferimenti correlati: PMID:7525274
• Destabilizzando e inibendo l'assemblaggio delle convertasi C3 e C5, CD55 protegge le cellule autologhe dalla lisi mediata dal complemento e dai danni tissutali. Riferimenti correlati: PMID:28657829
• Oltre alla regolazione del complemento, CD55 funge da recettore cellulare per diversi picornavirus, tra cui il coxsackievirus A21, i coxsackievirus B1, B3 e B5, gli enterovirus umani 70 e D68 e gli echovirus 6, 7, 11, 12, 20 e 21.
• È espresso sulla membrana plasmatica di praticamente tutte le cellule che entrano in contatto con le proteine del complemento plasmatico, nonché sulle cellule epiteliali che rivestono i compartimenti extracellulari; forme solubili sono presenti anche nei fluidi corporei e nella matrice extracellulare.
• La proteina contiene molteplici siti di glicosilazione N-linked e quattro domini sushi (CCP) N-terminali, essenziali per il legame al ligando; lo splicing alternativo genera varianti ancorate al GPI e varianti secrete.
• Clinicamente, le mutazioni di CD55 sono associate alla sindrome CHAPLE (iperattivazione del complemento, trombosi angiopatica ed enteropatia con perdita di proteine) e la molecola ospita gli antigeni del gruppo sanguigno Cromer.
• Il polipeptide maturo ha una massa prevista di circa 41 kDa, ma l'ampia glicosilazione determina un pattern eterogeneo di bande, compreso tra 39 kDa e 59 kDa nel western blot.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno copre l'intero dominio extracellulare (aa 35–353), suggerendo che l'anticorpo si leghi al CD55 nativo sulle cellule vive; validare la colorazione in condizioni non permeabilizzanti per il rilevamento della superficie cellulare.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo nell'intervallo 0,1–5 µg/mL utilizzando cellule mononucleate del sangue periferico umano o linee cellulari trasfettate con CD55, al fine di determinare la concentrazione ottimale.
• Includere controlli isotipici appropriati e reagenti bloccanti per i recettori Fc per ridurre al minimo il legame aspecifico, soprattutto nei campioni con elevata espressione di FcγR.
• Poiché CD55 viene rilasciato dalla membrana, considerare la colorazione sia delle cellule primarie sia dei surnatanti corrispondenti qualora si stiano studiando le forme solubili.
• Verificare la reattività crociata nel proprio sistema sperimentale specifico; è stato riportato che l'anticorpo reagisce con CD55 umano, ma le prestazioni nei primati non umani o nei modelli di roditori devono essere confermate individualmente.

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