Anticorpo monoclonale coniugato di coniglio anti-umano CD62E/E-Selectina per Citometria a Flusso - P16581

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'E-Selectina

• L'E-selectina, nota anche come CD62E, ELAM-1 o LECAM2, è una glicoproteina di superficie cellulare codificata dal gene SELE. Appartiene alla famiglia delle selectine, molecole di adesione caratterizzate da un dominio lectina N-terminale, un dominio simile all'EGF e ripetizioni multiple di domini sushi (proteine di controllo del complemento).
• La funzione primaria dell'E-selectina è mediare l'adesione dei leucociti all'endotelio attivato durante l'infiammazione. Riconosce e si lega a specifici ligandi carboidrati, in particolare il sialil-Lewis X, presenti su neutrofili, monociti e linfociti T memoria.
• L'E-selectina non è espressa costitutivamente; la sua trascrizione è indotta da citochine come il fattore di necrosi tumorale alfa (TNF-α) e l'interleuchina-1 (IL-1). Questa espressione strettamente regolata garantisce una risposta di adesione rapida e transitoria nei siti di lesione o infezione.
• Oltre al suo ruolo nella sorveglianza immunitaria, l'E-selectina è implicata nella morfogenesi capillare, suggerendo una funzione nell'angiogenesi e nel rimodellamento vascolare.
• La proteina è una glicoproteina transmembrana di tipo I, ancorata nella membrana plasmatica con i suoi domini di legame del ligando esposti sulla superficie cellulare. La sua regione extracellulare contiene molteplici domini stabilizzati da legami disolfuro e siti di legame per il calcio.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono un dominio lectina di tipo C N-terminale responsabile del riconoscimento carboidrato dipendente dal calcio, seguito da un singolo dominio simile al fattore di crescita epidermico (EGF) e sei ripetizioni a consenso breve (domini sushi). La breve coda citoplasmatica può interagire con il citoscheletro e molecole di segnalazione intracellulare.
• L'E-selectina subisce modificazioni post-traduzionali, inclusa N-glicosilazione e la formazione di legami disolfuro intra-catena, che sono critici per il suo corretto ripiegamento e l'attività di legame del ligando.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato sviluppato utilizzando un immunogeno corrispondente alla regione extracellulare (amminoacidi 22-230) dell'E-selectina umana, che comprende i domini lectina e simile all'EGF. Questo design favorisce epitopi accessibili nelle conformazioni native, rendendo il clone particolarmente adatto per applicazioni di citometria a flusso.
• Per la colorazione in citometria a flusso, utilizzare una sospensione di singole cellule preparata da cellule endoteliali attivate o popolazioni leucocitarie. Si consiglia di titolare l'anticorpo per determinare il rapporto segnale-rumore ottimale per il proprio specifico sistema modello.
• Includere appropriati controlli isotipo e discriminazione cellule vive/morte per garantire la specificità. L'espressione di E-selectina può essere bassa sulle cellule a riposo, quindi è raccomandata la stimolazione con citochine (es. trattamento con TNF-α) per aumentare l'espressione del target.
• Il coniugato è compatibile con le comuni linee laser rosso/arancio (es. 561 nm o 594 nm) e può essere combinato con altri fluorofori in pannelli multicolore. Validare le impostazioni di compensazione della sovrapposizione spettrale sul proprio strumento.
• Proteggere sempre gli anticorpi coniugati dalla luce ed evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento per mantenere la stabilità del fluoroforo.

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