mAb coniugato coniglio anti-CEACAM5/CD66e umano per FC - P06731

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CEACAM5

• CEACAM5 (Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5), noto anche come CEA o CD66e, è una glicoproteina di superficie cellulare e un membro della famiglia dell'antigene carcinoembriogenico (CEA), codificata dal gene CEACAM5 (GeneID: 1048).
• Svolge la sua funzione nell'adesione cellulare, mediando sia legamenti omofili che interazioni eterofile con altri membri della famiglia CEACAM come CEACAM6, e contribuisce alle vie di segnalazione intracellulare che influenzano la progressione tumorale. Riferimenti correlati: PMID:10864933 PMID:10910050 PMID:2803308
• Svolge un ruolo oncogeno promuovendo la progressione tumorale e indurre la resistenza all'anoikis (apoptosi indotta dal distacco) nelle cellule di carcinoma colorettale, aumentando il potenziale metastatico. Riferimenti correlati: PMID:10910050
• In quanto recettore per le adesine Dr di E.coli, il legame con CEACAM5 facilita l'attaccamento batterico e può contribuire alla patogenesi della diarrea infettiva.
• È localizzato principalmente sulla membrana cellulare apicale e sulla superficie cellulare, in linea con il suo ruolo nell'adesione cellulare e nella trasduzione del segnale.
• La proteina è ampiamente glicosilata e attaccata alla membrana tramite un ancoraggio a glicosilfosfatidilinositolo (GPI); contiene domini simili alle immunoglobuline e legami disolfuro essenziali per la sua struttura.
• L'espressione è prevalentemente nelle cellule epiteliali colonnari e nelle cellule caliciformi del colon, ed è fortemente upregolata negli adenocarcinomi dell'apparato digerente e nel colon fetale, rendendolo un marcatore tumorale molto noto. Riferimenti correlati: PMID:10436421

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende gli amminoacidi 35-685 di CEACAM5 umano, che comprende l'intero dominio extracellulare. Pertanto, l'anticorpo è in grado di rilevare la conformazione nativa legata alla membrana nei saggi di citometria a flusso.
• Per la citometria a flusso, utilizzare un anticorpo di controllo isotipo appropriato (IgG di coniglio, stesso fluoroforo) per valutare il legame non specifico.
• Eseguire la titolazione dell'anticorpo (ad esempio, 0,1–10 μg/mL) sulla linea cellulare di tuo interesse per determinare l'indice di colorazione ottimale.
• Scegliere una linea cellulare con espressione confermata di CEACAM5 (ad esempio, cellule di adenocarcinoma colorettale come HT-29 o LS174T) come controllo positivo e una linea negativa per CEACAM5 come controllo negativo.
• è un equivalente luminoso e fotostabile di Alexa Fluor® 488, che garantisce flessibilità nella progettazione di pannelli multicolore. Assicurarsi di eseguire la compensazione quando si utilizzano altri fluorofori del canale verde.
• Per la colorazione intracellulare, prendere in considerazione un protocollo di fissazione e permeabilizzazione ottimizzato per proteine di superficie cellulare ancorate a GPI, poiché una permeabilizzazione forte può alterare la localizzazione sulla membrana.

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