Anticorpo monoclonale di coniglio anti-citocheratina 8 umana per citometria a flusso intracellulare - P05787

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della citocheratina 8

• La cheratina 8 (K8/CK8), codificata dal gene KRT8, è una proteina dei filamenti intermedi di cheratina di tipo II che forma eteropolimeri obbligati con il suo partner di tipo I KRT18 nelle cellule epiteliali semplici (PubMed:26823019).
  Riferimenti correlati: PMID:26823019
• La KRT8 fornisce stabilità meccanica e resilienza agli epiteli e protegge le cellule dallo stress non meccanico, come l'apoptosi (per similarità).
• È necessaria per la formazione delle fibre di stress dell'actina mediata da ARHGEF40 e per il rinforzo delle fibre di stress indotto dalla forza di tensione (PubMed:26823019).
  Riferimenti correlati: PMID:26823019
• Nel muscolo striato, KRT8 e KRT19 possono collegare l'apparato contrattile alla distrofina a livello dei costameri (PubMed:16000376).
  Riferimenti correlati: PMID:16000376
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente nel citoscheletro citoplasmatico, ma viene rilevata anche nel nucleoplasma e nella matrice nucleare.
• Le modifiche post-traduzionali includono acetilazione, fosforilazione, metilazione, ubiquitinazione e glicosilazione, che ne modulano l'assemblaggio e la funzione.
• Specificità tissutale: espressa negli epiteli semplici (es. mucosa gengivale, palato duro) e nelle fibre muscolari a livello dei costameri.
• Rilevanza clinica: associata a varianti patologiche e interazioni ospite-virus, evidenziando il suo ruolo nella patologia.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per la citometria a flusso intracellulare, fissare e permeabilizzare le cellule utilizzando protocolli ottimizzati (es. PFA al 4% seguito da Triton X-100 allo 0,1% o tamponi a base di saponina) per consentire all'anticorpo di accedere alla rete di cheratina citosolica.
• Titolare l'anticorpo marcato per determinare la concentrazione di colorazione ottimale; le diluizioni iniziali tipiche sono comprese tra 1:50 e 1:200, ma variano in base al tipo cellulare.
• Utilizzare anticorpi di controllo isotipico appropriati per impostare le soglie di gating e confermare la specificità della colorazione KRT8.
• Le cellule HeLa o altre linee cellulari epiteliali semplici (es. MCF-7) possono fungere da controlli positivi a causa dell'elevata espressione di KRT8; considerare l'utilizzo di cellule knockout o knockdown come controlli negativi, se disponibili.
• Proteggere l'anticorpo da un'esposizione prolungata alla luce per evitare il fotobleaching del fluoroforo durante la colorazione e l'acquisizione.
• L'immunogeno copre quasi l'intera lunghezza della KRT8 (aa 1-483), suggerendo che l'anticorpo probabilmente riconosce la conformazione nativa; tuttavia, la validazione per altre applicazioni (es. WB, IHC) non è stata fornita e dovrebbe essere verificata in modo indipendente.

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