Coniglio anti-Umano FAP Anticorpo Monoclonale per FC - Q12884

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione della Prolil Endopeptidasi FAP

• La prolil endopeptidasi FAP (FAP) è una sierina proteasi glicoproteica di superficie cellulare, nota anche come proteina di attivazione dei fibroblasti alfa, seprasi e gelatinasi di membrana legata da 170 kDa nel melanoma. Esistono multiple isoforme dovute allo splicing alternativo.
• La FAP exhibits sia attività endopeptidasica di clivaggio post-prolina sia attività di peptidil dipeptidasi. L'attività endopeptidasica ha come target substrati con sequenze Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala, come l'alfa-2-antiplasmina e SPRY2. Riferimenti correlati: PMID:14751930, PMID:16223769, PMID:16410248
• L'attività di peptidil dipeptidasi idrolizza i legami prolilici in dipeptidi sintetici e agisce su neuropeptidi naturali tra cui NPY, PYY, sostanza P e BNP32. Riferimenti correlati: PMID:10347120, PMID:10593948, PMID:16175601, PMID:21314817
• La FAP degrada la gelatina e il collagene di tipo I denaturato dal calore, ma non i collagene nativi di tipo I e IV, vitronectina, tenascina, laminina, fibronectina, fibrina o caseina, contribuendo al rimodellamento della matrice extracellulare (ECM). Riferimenti correlati: PMID:10347120, PMID:10455171, PMID:12376466
• Attraverso le sue attività proteasiche, la FAP regola la proteolisi pericellulare, promuovendo l'adesione, la migrazione e l'invasione cellulare. Gioca un ruolo nel rimodellamento tissutale, fibrosi, guarigione delle ferite, infiammazione e progressione tumorale, incluso il miglioramento dell'angiogenesi e l'evasione immunitaria.
• A livello subcellulare, la FAP si localizza sulla superficie cellulare e sulla membrana, in particolare nelle proiezioni cellulari come lamellipodia, invadopodia e ruffles. Sono anche secretate forme solubili nello spazio extracellulare e rilevate nel citoplasma.
• L'espressione tissutale è in gran parte limitata ai fibroblasti attivati in condizioni patologiche: ferite in guarigione, fegato cirrotico (cellule stellate epatiche), tessuti sinoviali infiammati e stroma reattivo dei carcinomi epiteliali. È altamente espressa nelle cellule gliomali e nelle linee di melanoma, ma assente nel fegato normale. Il tessuto adiposo esprime anche la FAP.
• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione e formazione di ponti disolfuro, ed è sintetizzata come una proteina di membrana di tipo II a passaggio singolo con un segnale di ancoraggio.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è progettato per applicazioni di citometria a flusso (FC). L'immunogeno copre gli amminoacidi 26-760 della FAP umana, coprendo il dominio extracellulare. Il fluoroforo consente il rilevamento diretto senza reagenti secondari, riducendo il rumore di fondo.
• Per la colorazione di superficie di cellule vive, incubare con l'anticorpo sul ghiaccio in tampone di blocco. Per il rilevamento intracellulare o totale della FAP, considerare protocolli di fissazione e permeabilizzazione.
• La concentrazione ottimale dell'anticorpo deve essere determinata tramite titolazione nel sistema cellulare pertinente. Includere controlli di isotipo appropriati e coloranti vitali per escludere le cellule morte dall'analisi.
• Dato che la FAP è espressa sui fibroblasti attivati nello stroma tumorale e nei tessuti in guarigione, utilizzare controlli positivi e negativi appropriati (es. fibroblasti associati al cancro FAP-positivi rispetto a fibroblasti di tessuto normale o linee cellulari FAP-negative).
• A causa del potenziale rilascio (shedding), le forme secretate di FAP possono essere presenti nel soprannatante; per una colorazione di superficie accurata, lavare accuratamente le cellule prima della colorazione.

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