Anticorpo monoclonale coniglio anti-HER2/ErbB2 umano per Citometria a Flusso - P04626

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di HER2/ErbB2

• HER2/ErbB2 è una proteina recettore tirosin-chinasi che funziona all'interno dei complessi recettoriali della superficie cellulare e richiede un corecettore per il legame con il ligando. È un componente essenziale del complesso recettoriale della neuregulina, sebbene le neureguline non interagiscano direttamente con esso.
• La proteina regola la crescita e la stabilizzazione dei microtubuli tramite l'asse di segnalazione MEMO1-RHOA-DIAPH1, che inibisce GSK3B e promuove la localizzazione membranale di APC e MACF1, elementi critici per l'acquisizione dei microtubuli.
• Nel nucleo, HER2 agisce come regolatore trascrizionale: lega il promotore di PTGS2/COX-2 per attivare la trascrizione e partecipa all'attivazione trascrizionale di CDKN1A insieme a STAT3 e SRC.
• È anche coinvolto nella trascrizione dei geni dell'rRNA da parte della RNA polimerasi I, migliorando così la sintesi proteica e la crescita cellulare.
• Subcellolarmente, HER2 si localizza sulla membrana cellulare, nella membrana delle rufflature, negli endosomi precoci, nel citoplasma (regione perinucleare) e nel nucleo, riflettendo i suoi doppi ruoli nella segnalazione e nella trascrizione.
• L'espressione è osservata in diversi tessuti tumorali, inclusi i tumori primari della mammella, dell'intestino tenue, dell'esofago, del rene e del cavo orale, sottolineandone l'importanza oncogena.
• Le caratteristiche strutturali chiave includono un peptide segnale, un grande dominio extracellulare, una singola elica transmembrana e un dominio tirosin-chinasico intracellulare. Le modificazioni post-traduzionali comprendono fosforilazione, glicosilazione e formazione di legami disolfuro.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo è adatto per la citometria a flusso (FC) e riconosce il dominio extracellulare di HER2 umano. Utilizzare linee cellulari HER2-positive appropriate (es. SK-BR-3, BT-474) come controllo positivo e linee HER2-negative (es. MCF-7) come controllo negativo.
• Per la colorazione della superficie cellulare, raccogliere cellule vive ed eseguire la colorazione senza fissazione/permeabilizzazione per preservare l'epitopo extracellulare. Includere un controllo isotipico e un blocco Fc per minimizzare il legame non specifico.
• Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per le vostre condizioni sperimentali specifiche; le concentrazioni iniziali tipiche variano da 0,1 a 1 µg per test.
• Poiché l'immunogeno copre gli aminoacidi 23-652, l'anticorpo potrebbe non rilevare isoforme che mancano di questa regione o con troncamenti N-terminali. Validare l'espressione nel vostro sistema cellulare bersaglio se utilizzate isoforme alternative.
• Proteggere il coniugato dall'esposizione prolungata alla luce per mantenere la stabilità della fluorescenza. Conservare l'anticorpo come raccomandato ed evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento.

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