Anticorpo monoclonale coniugato di coniglio anti-IgG umana (Fc) per Citometria a flusso - P01857

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di IgG (Fc)

• Il bersaglio è la regione costante (Fc) della catena pesante dell'immunoglobulina gamma-1 umana (IgG1), codificata dal gene IGHG1, corrispondente agli amminoacidi 100-330 della proteina matura (UniProt P01857). Questa regione media le funzioni effettrici tramite l'interazione con i recettori Fc e il complemento.
• Le catene pesanti delle immunoglobuline sono fondamentali per l'immunità adattativa: le Ig legate alla membrana fungono da recettore delle cellule B, mentre gli anticorpi secreti neutralizzano i patogeni. La regione Fc dell'IgG1 innesca specificamente la citotossicità cellulare anticorpo-dipendente, la citotossicità complemento-dipendente e la fagocitosi (PubMed:17576170, PubMed:20176268, PubMed:22158414). Riferimenti correlati: PMID:17576170 PMID:20176268 PMID:22158414
• L'IgG1 è composta da due catene pesanti identiche legate da ponti disolfuro a due catene leggere; ogni catena pesante contiene un dominio variabile (codificato dai segmenti V, D, J) e tre domini costanti (CH1, CH2, CH3). I domini CH2 e CH3 formano il frammento Fc bersagliato da questo anticorpo.
• Il gene IGHG1 fa parte del locus della catena pesante delle immunoglobuline sul cromosoma 14, e la ricombinazione di scambio di classe da IgM/IgD a IgG1 avviene nelle cellule B attivate, modellando il repertorio anticorpale.
• L'IgG1 è l'isotipo anticorpale più abbondante nel siero umano ed è cruciale per l'immunità umorale a lungo termine, spesso utilizzata come scaffold per anticorpi terapeutici.
• Localizzazione subcellulare: le catene pesanti dell'IgG1 sono secrete come anticorpi o esposte sulla superficie delle cellule B come immunoglobuline legate alla membrana (forma transmembrana).
• Le modifiche post-traduzionali includono la formazione di legami disolfuro e la N-glicosilazione nel dominio CH2 conservato, essenziale per il legame con i recettori Fc e la stabilità.
• Parole chiave: immunità adattativa, secreto, membrana cellulare, glicoproteina, dominio delle immunoglobuline, legame disolfuro.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'anticorpo è coniugato con , un fluoroforo fotostabile con massimi di eccitazione/emissione ~590/617 nm, compatibile con citometri a flusso standard. Assicurarsi impostazioni strumentali e compensazione appropriate.
• Per la citometria a flusso, titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale di colorazione (tipicamente 0,5-5 µg per 10^6 cellule) utilizzando cellule di controllo positive e negative che esprimono IgG umana (es. cellule B umane o linee cellulari che esprimono IgG di membrana).
• Poiché l'anticorpo riconosce la regione Fc, potrebbe legarsi a IgG libere nel siero o nel terreno di coltura; lavare accuratamente le cellule per ridurre il fondo.
• Questo clone può essere utilizzato per rilevare IgG di superficie su cellule B umane, o per l'identificazione di particelle rivestite da IgG o immunocomplessi in contesti di ricerca.
• Evitare fissazione/permeabilizzazione aggressiva che possa alterare l'epitopo Fc; una fissazione lieve con paraformaldeide (1-4%) è generalmente compatibile.
• Utilizzare reagenti di blocco del recettore Fc quando si colorano cellule con elevata espressione di FcγR per prevenire il legame aspecifico.
• Valutare la reattività crociata con altre sottoclassi di IgG (IgG2, IgG3, IgG4) se necessario, poiché le sequenze della regione Fc presentano un'elevata omologia.

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