Anticorpo monoclonale di coniglio anti-IL-1β umano per citometria a flusso intracellulare - P01584

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione dell'interleuchina-1 beta

• IL-1β (interleuchina-1 beta, nota anche come catabolina) è una potente citochina pro-infiammatoria e un membro della famiglia delle interleuchine-1. È codificata dal gene IL1B nell'uomo (Gene ID: 3553).
• IL-1β agisce come un importante pirogeno endogeno, inducendo la sintesi di prostaglandine, l'afflusso e l'attivazione dei neutrofili, la stimolazione delle cellule T e B, nonché la proliferazione dei fibroblasti e la produzione di collagene. Riferimenti correlati: PMID:3920526
• Promuove la differenziazione Th17 e agisce sinergicamente con IL-12 per indurre la sintesi di IFN-γ da parte delle cellule Th1. Riferimenti correlati: PMID:10653850
• IL-1β contribuisce all'angiogenesi inducendo la produzione di VEGF in sinergia con TNF e IL-6. Riferimenti correlati: PMID:12794819
• In seguito all'attivazione dell'inflammasoma e alla piroptosi, l'IL-1β maturo viene rilasciato attraverso i pori della gasdermina-D (GSDMD), svolgendo un ruolo critico nella trasduzione dell'infiammazione a valle della morte cellulare. Riferimenti correlati: PMID:33377178 PMID:33883744
• Durante l'infezione cutanea da Streptococcus pyogenes, IL-1β agisce come sensore: viene scissa e attivata dalla proteasi batterica SpeB, innescando una risposta infiammatoria che limita la proliferazione batterica. Riferimenti correlati: PMID:28331908
• A livello subcellulare, IL-1β si trova nel citoplasma, nel citosol e nei lisosomi, e viene secreta nello spazio extracellulare, anche attraverso gli esosomi.
• A livello proteico, è espressa principalmente nei monociti e nei macrofagi attivati.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno corrisponde all'IL-1β maturo (aa 117-269), il che implica che l'anticorpo può rilevare sia le forme pro- che quelle scisse. Per la citometria a flusso intracellulare, assicurarsi di eseguire una fissazione e una permeabilizzazione complete.
• Ottimizzare le condizioni di permeabilizzazione (ad esempio, saponina o metanolo) per preservare l'accessibilità dell'epitopo consentendo al contempo l'ingresso dell'anticorpo. Se necessario, includere un colorante di vitalità per escludere le cellule morte.
• Validare l'anticorpo nel proprio specifico contesto cellulare stimolando con attivatori noti dell'inflammasoma (ad esempio, LPS + ATP) e confrontando i risultati con controlli non stimolati.
• Eseguire un esperimento di titolazione per determinare la concentrazione ottimale dell'anticorpo, bilanciando il segnale specifico rispetto al fondo nelle cellule permeabilizzate.
• Questo anticorpo è specifico per l'IL-1β umano; non si prevede reattività crociata con l'IL-1β di topo o ratto sulla base della sequenza dell'immunogeno, ma ciò deve essere verificato se l'anticorpo viene utilizzato in altre specie.

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