Anticorpo monoclonale coniugato Rabbit anti-Human LAMP2 per IF/ICC e FC intracellulare - P13473

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di LAMP2

• LAMP2 (Glicoproteina 2 associata alla membrana lisosomiale), nota anche come CD107b, LAMP-2, LGP-96 o LGP110, è una proteina transmembrana altamente glicosilata codificata dal gene LAMP2. Attraverso lo splicing alternativo, produce tre isoforme principali: LAMP-2A, LAMP-2B e LAMP-2C, che differiscono per le loro code citosoliche e mostrano distribuzioni tissutali distinte.
• Come glicoproteina chiave della membrana lisosomiale, LAMP2 svolge un ruolo essenziale nella biogenesi dei lisosomi e nella regolazione del pH agendo come inibitore diretto del canale protonico TMEM175, facilitando così l'acidificazione lisosomiale e l'attività ottimale delle idrolasi. Riferimenti correlati: PMID:37390818
• LAMP2 è un mediatore centrale dell'autofagia mediata da chaperone (CMA), una via di degradazione selettiva. Lega complessi chaperonici citosolici (es. HSPA8/HSC70) che consegnano proteine bersaglio come GAPDH, GPX4, NLRP3 e MLLT11 alla membrana lisosomiale, dove LAMP2 agisce come recettore per traslocare i substrati nel lisosoma per la degradazione. Riferimenti correlati: PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• LAMP2 è necessario per la fusione degli autofagosomi con i lisosomi durante la macroautofagia; le cellule prive di LAMP2 non accumulano STX17 sugli autofagosomi, il che impedisce la fusione e compromette la degradazione del carico autofagico. Riferimenti correlati: PMID:27628032
• LAMP2 facilita una presentazione efficiente mediata da MHC di classe II di antigeni esogeni, consentendo la degradazione lisosomiale e il successivo caricamento di peptidi antigenici sulle nascenti molecole MHC II, sebbene non sia indispensabile per la presentazione di antigeni endogeni. Riferimenti correlati: PMID:15894275, PMID:20518820
• A livello subcellulare, LAMP2 si localizza principalmente sulla membrana lisosomiale, ma si trova anche nelle membrane endosomiali, autofagosomiali e plasmatiche, riflettendo il suo traffico dinamico e le sue funzioni nelle vie endolisosomiali e autofagiche.
• Si osservano modelli di espressione specifici per isoforma: LAMP-2A è altamente espresso in placenta, polmone e fegato, mentre LAMP-2B e LAMP-2C mostrano distribuzioni distinte in tessuti come milza, timo, cervello e intestino tenue. Riferimenti correlati: PMID:26856698, PMID:7488019
• Da notare, LAMP2 è associata alla malattia di Danon, un disturbo da accumulo di glicogeno, e il suo studio coinvolge parole chiave come splicing alternativo, autofagia, legame disolfuro, glicoproteina ed elica transmembrana.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde agli amminoacidi 29-375 di LAMP2 umano, coprendo un ampio dominio luminale comune a tutte le isoforme; questa ampia copertura supporta il rilevamento di molteplici varianti di LAMP2 laddove lo consente l'omologia di sequenza.
• L'anticorpo è direttamente coniugato ad , consentendo una colorazione in un solo passaggio per immunofluorescenza (IF/ICC) e citometria a flusso intracellulare (FC intra) senza la necessità di anticorpi secondari.
• Per la citometria a flusso intracellulare, sono richieste fissazione e permeabilizzazione; utilizzare protocolli standard (es. fissazione con PFA 4% seguita da permeabilizzazione con saponina o Triton X-100) e ottimizzare i tempi di incubazione e le concentrazioni di anticorpo per il proprio tipo cellulare specifico.
• Convalidare le prestazioni dell'anticorpo nel sistema biologico rilevante (umano) e includere controlli positivi e negativi appropriati (es. cellule wild-type versus cellule con knockdown di LAMP2) per confermare la specificità.
• Poiché LAMP2 è altamente glicosilata ed esiste in molteplici isoforme, il peso molecolare apparente in Western blot può differire dai 44-45 kDa previsti; il test WB non è elencato, quindi se necessario, considerare esperimenti pilota per verificare la capacità di rilevamento.

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