Anticorpo monoclonale coniglio anti-Umano PCSK9 per Citometria a flusso - Q8NBP7

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del PCSK9

• PCSK9 è una proproteina convertasi subtilisina/chexina tipo 9, nota anche come NARC-1, che regola l'omeostasi del colesterolo plasmatico legandosi ai membri della famiglia dei recettori LDL e promuovendone la degradazione. Riferimenti correlati: PMID:18039658
• Agisce tramite un meccanismo non proteolitico per migliorare la degradazione epatica di LDLR attraverso una via mediata dalla clatrina, indirizzando probabilmente LDLR ai lisosomi. Riferimenti correlati: PMID:17461796, PMID:18197702, PMID:18799458
• PCSK9 inibisce anche la degradazione di APOB tramite la via autofagosoma/lisosoma e regola lo smaltimento di BACE1. Riferimenti correlati: PMID:18660751
• Modula l'apoptosi neuronale alterando i livelli di LRP8/APOER2 e inibisce l'assorbimento di Na+ mediato da ENaC riducendo l'espressione superficiale di ENaC.
• Si localizza nel citoplasma, viene secreto e si trova negli endosomi, lisosomi, superficie cellulare, reticolo endoplasmatico e apparato di Golgi.
• Sintetizzato come zimogeno, PCSK9 subisce clivaggio autocatalitico; ulteriori modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, fosforilazione, solfatazione e formazione di legami disolfuro.
• L'espressione tissutale è riportata in neuroepitelioma, carcinoma del colon, linee cellulari epatiche e pancreatiche e cellule di Schwann.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è progettato per la citometria a flusso intracellulare; pertanto, le cellule devono essere fissate e permeabilizzate prima della colorazione. Ottimizzare il protocollo di fissazione/permeabilizzazione per il tipo di cellule target.
• L'immunogeno (aa 31–692 del PCSK9 umano) comprende il dominio pro e il dominio catalitico, quindi l'anticorpo potrebbe rilevare sia le forme full-length che quelle clivate di PCSK9; validare il rilevamento nel contesto biologico pertinente.
• Come anticorpo coniugato direttamente , non è richiesto alcun anticorpo secondario, semplificando la procedura di colorazione e riducendo il background.
• Eseguire la titolazione dell'anticorpo nel proprio saggio per determinare la concentrazione ottimale; un intervallo di partenza tipico per gli anticorpi coniugati in citometria a flusso è 0,125–1 µg per milione di cellule, ma questo deve essere verificato empiricamente.
• Questo anticorpo è validato su campioni umani; la reattività crociata con altre specie non è stata testata.
• Includere i controlli appropriati (controllo isotipico, campione non stimolato) e considerare la conferma della specificità tramite knockdown siRNA o blocco con PCSK9 ricombinante.

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