Rabbit anti-Human Phospho-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 mAb - P27986 / O00459 / Q92569

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione delle subunità regolatorie PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• PIK3R1 codifica per la subunità regolatoria p85α della PI3K, che esiste come multiple isoforme (p85α, p55α, p50α) attraverso splicing alternativo. L'isoforma p85α è la proteina a lunghezza intera, mentre le isoforme più corte mancano del dominio SH3 N-terminale e della regione di omologia BH. Questo anticorpo riconosce le forme fosforilate attraverso i tre prodotti genici PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) e PIK3R3 (p55γ).
• Le subunità regolatorie si legano alle protein-tirosin chinasi attivate (fosforilate) tramite i loro domini SH2, funzionando come molecole adattatrici che reclutano la subunità catalitica p110 alla membrana plasmatica, attivando così la segnalazione PI3K. Riferimenti correlati: PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• Le subunità regolatorie PI3K sono essenziali per l'assorbimento di glucosio stimolato dall'insulina e per la sintesi del glicogeno nei tessuti sensibili all'insulina come il muscolo scheletrico e il fegato. Mediano anche la segnalazione a valle dei recettori dei fattori di crescita (FGFR1-4, PDGFR, KIT) e dell'integrina ITGB2. Riferimenti correlati: PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α modula la risposta cellulare allo stress del reticolo endoplasmatico (ER) promuovendo la translocazione nucleare dell'isoforma 2 di XBP1 in modo dipendente dallo stress dell'ER e/o dall'insulina, in particolare durante il sovraccarico metabolico nel fegato, migliorando così la tolleranza al glucosio. Riferimenti correlati: PMID:20348923
• Le subunità p85α/p85β/p55γ sono principalmente citoplasmatiche, dove si associano alla subunità catalitica p110. Dopo l'attivazione, vengono reclutate alla membrana plasmatica per localizzare l'oloenzima PI3K vicino ai suoi substrati lipidici.
• Le modifiche post-traduzionali includono la fosforilazione su residui tirosina multipli (es. Y467 di p85α, Y464 di p85β, Y199 di p55γ) da parte di tirosin chinasi recettoriali e non recettoriali, il che è fondamentale per regolare l'attività PI3K e le interazioni proteina-proteina. Ulteriori modifiche includono acetilazione e ubiquitinazione.
• L'isoforma 2 di PIK3R1 (p55α) è altamente espressa nel muscolo scheletrico e nel cervello, con livelli più bassi nel rene e nel muscolo cardiaco. A livello proteico, sia l'isoforma 2 che l'isoforma 4 (p50α) vengono rilevate nel muscolo scheletrico, suggerendo ruoli specifici per i tessuti nella segnalazione dell'insulina e nel metabolismo.
• Le mutazioni in PIK3R1 sono associate alla sindrome SHORT (statura bassa, iperestensibilità, depressione oculare, anomalia di Rieger e ritardo della dentizione) e ad altri disturbi correlati alla crescita, evidenziando il suo ruolo nello sviluppo e nella segnalazione del fattore di crescita insulino-simile.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che comprende Y467 della p85α umana. Assicurarsi che il sistema sperimentale preservi la fosforilazione — utilizzare inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione e considerare le condizioni di stimolazione (es. insulina, fattori di crescita) per migliorare il rilevamento dell'epitopo fosforilato.
• Questo anticorpo è validato per la citometria a flusso intracellulare (FC). Per una colorazione ottimale, fissare e permeabilizzare le cellule utilizzando protocolli compatibili con il rilevamento fosfo-specifico (es. fissazione con formaldeide seguita da permeabilizzazione con metanolo). Titolare l'anticorpo per determinare la diluizione ottimale per il tipo di cellule e le condizioni di trattamento.
• Poiché l'anticorpo riconosce la fosfo-Y467 di p85α, la fosfo-Y464 di p85β e la fosfo-Y199 di p55γ, l'intervallo di peso molecolare osservato può variare. Nel western blotting (se tentato), le bande possono apparire tra 42-54 kDa (per le isoforme più corte) e 81-84 kDa (per p85α/p85β a lunghezza intera). Eseguire controlli positivi appropriati (es. cellule HepG2 o HeLa stimolate con insulina) e verificare la specificità utilizzando il trattamento con fosfatasi.
• Considerare l'uso di questo anticorpo in combinazione con anticorpi contro le subunità regolatorie totali PI3K per valutare i rapporti di fosforilazione negli studi di segnalazione. Per la FC quantitativa, assicurarsi che il fluoroforo sia compatibile con la configurazione del citometro e che i controlli di compensazione siano inclusi in caso di multiplexing.
• La reattività incrociata è riportata per l'umano. Se si lavora con altre specie, validare la conservazione dei siti fosforilati bersaglio utilizzando l'allineamento delle sequenze prima dell'uso.

CamelBio: Il tuo ponte di approvvigionamento "tutto in uno"

CamelBio si specializza nel fornire ai produttori di diagnostica, ai laboratori e agli istituti di ricerca un accesso "tutto in uno" a materie prime IVD, servizi tecnici e consulenza — dal concetto alla clinica. Questo anticorpo anti-subunità regolatoria fosfo-PI3K supporta la ricerca sulle vie di segnalazione PI3K/AKT comunemente implicate nel cancro, nei disturbi metabolici e nell'immunologia. Attraverso la nostra rete di approvvigionamento integrata, possiamo fornire coppie di anticorpi validate, anticorpi monoclonali/policlonali ottimizzati, reagenti ausiliari in blocco e persino materie prime per bersagli rari per accelerare le vostre esigenze di sviluppo e produzione dei saggi.