Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Siglec-8 umano per FC - Q9NYZ4

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione della Siglec-8

• La Siglec-8 (lectina 8 simile alle Ig che lega l'acido sialico), anche denominata membro 2 della famiglia delle sialoadesine (SAF-2), è un membro della famiglia di lectine delle sialoadesine.
• È una putativa molecola di adesione che media il legame dipendente dall'acido sialico alle cellule del sangue. Riferimenti correlati: PMID:10625619 PMID:10856141
• La Siglec-8 si lega preferenzialmente all'acido sialico α-2,3-legato e, in misura minore, all'acido sialico α-2,6-legato; le interazioni cis sulla stessa superficie cellulare possono mascherare il sito di legame. Riferimenti correlati: PMID:10625619
• Riconosce l'acido N-acetilneuraminico terminale (acido sialico) associato a un galattosio 6-O-solfatato, mostrando una preferenza per gli epitopi glicani Gal-6-solfatati del sialil-Lewis X. Riferimenti correlati: PMID:27357658
• La proteina è una glicoproteina di membrana di tipo I a singolo passaggio, contenente domini simili alle immunoglobuline, un peptide segnale e un'elica transmembrana; presenta ponti disolfuro e potenziali siti di glicosilazione.
• L'espressione è altamente limitata alle cellule del sangue, principalmente basofili, mastociti ed eosinofili.
• Lo splicing alternativo genera isoforme con pesi molecolari previsti di 44 kDa, 46 kDa e 54 kDa.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (dominio extracellulare, aa 17–363) suggerisce che l'anticorpo riconosca la regione prossimale alla membrana della Siglec-8 umana; valutare la verifica della colorazione della superficie cellulare rispetto alla colorazione intracellulare nel proprio saggio.
• Poiché si tratta di un anticorpo coniugato direttamente, non è necessaria una fase di colorazione secondaria; assicurare una minima esposizione alla luce e fissare le cellule, se necessario, per la citometria a flusso.
• Titolare l'anticorpo per determinare la concentrazione ottimale per il tipo specifico di campione; le diluizioni iniziali tipiche variano da 1:50 a 1:200, ma devono essere validate empiricamente.
• Utilizzare un controllo isotipico appropriato coniugato allo stesso fluoroforo per valutare il legame aspecifico.
• L'espressione della Siglec-8 è limitata a basofili, mastociti ed eosinofili: eseguire la co-colorazione con marcatori di linea (ad es., CD45, CD3, CD19, CD16, CD123, HLA-DR) per confermare le popolazioni cellulari.
• Per la colorazione del sangue intero, considerare la lisi degli eritrociti o la separazione su gradiente di densità per arricchire i leucociti e validare le strategie di gating con controlli positivi e negativi noti.

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