Anticorpo monoclonale coniugato con coniglio anti-TNF-α umano per citometria a flusso (intracellulare) - P01375

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del TNF-α

• Il fattore di necrosi tumorale (TNF-α), noto anche come cachectina e TNFSF2, è una citochina di 26 kDa codificata dal gene TNF sul cromosoma 6p21.3.

• Secernuta principalmente dai macrofagi, il TNF-α funge da potente pirogeno endogeno, inducendo febbre direttamente e tramite IL-1, ed è un mediatore chiave della cachessia nell'infiammazione cronica e nel cancro.

• Si lega a TNFRSF1A/TNFR1 e TNFRSF1B/TNFBR, innescando cascate di segnalazione che regolano la sopravvivenza, l'apoptosi e la differenziazione cellulare in un'ampia gamma di tipi cellulari.

• La citochina è sintetizzata come proteina transmembrana di tipo II; il suo dominio extracellulare solubile viene rilasciato da TACE/ADAM17, consentendo sia attività giustacrine locali che attività endocrine sistemiche.

• Le modifiche post-traduzionali includono glicosilazione, formazione di legami disolfuro, miristoilazione e fosforilazione, fondamentali per il corretto ripiegamento, il traffico e il legame al recettore.

• Nell'artrite reumatoide, il TNF-α promuove l'infiammazione autoimmune compromettendo la funzione delle cellule T regolatorie (Treg) attraverso la defosforilazione mediata da PP1 e l'inattivazione del fattore di trascrizione FOXP3 (PubMed:23396208).

  Riferimenti correlati: PMID:23396208

• Il TNF-α contribuisce all'immunità anticancro mediando la citotossicità dipendente dai neutrofili contro le cellule del cancro alla vescica in combinazione con farmaci mimetici di SMAC (PubMed:16829952, PubMed:22517918).

  Riferimenti correlati: PMID:16829952, PMID:22517918

• Induce sinergicamente la produzione di VEGF con IL-1β e IL-6 per promuovere l'angiogenesi (PubMed:12794819) e stimola l'osteoclastogenesi, guidando la distruzione ossea nelle malattie infiammatorie (Per similitudine).

  Riferimenti correlati: PMID:12794819

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno comprende il dominio extracellulare (amminoacidi 77-233), si prevede che l'anticorpo riconosca sia la forma legata alla membrana che quella solubile del TNF-α.
• Per la citometria a flusso intracellulare, assicurarsi protocolli di permeabilizzazione e fissazione adeguati per consentire l'accesso al TNF-α citoplasmatico; considerare l'uso di un controllo positivo noto come monociti attivati.
• Convalidare l'anticorpo nel sistema campione pertinente; il sangue intero umano o i PBMC stimolati con LPS possono essere utilizzati per indurre l'espressione del TNF-α per la colorazione intracellulare.
• Poiché il TNF-α è secreto, si consiglia di utilizzare un inibitore del trasporto proteico (ad es. brefeldina A o monensina) durante la stimolazione cellulare per accumulare la proteina intracellulare.
• Prestare attenzione per evitare il legame aspecifico titolando l'anticorpo e utilizzando controlli isotipo appropriati.

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