Anticorpo monoclonale coniugato, coniglio anti-CD14 Umano/Scimmia per citometria a flusso - P08571

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di CD14

• CD14 è una glicoproteina ricca di leucine specifica per le cellule mieloidi, nota anche come antigene di differenziazione monocitaria CD14 o antigene My23.
• CD14 funge da corecettore chiave per il lipopolisaccaride (LPS) batterico, mediando il riconoscimento e la risposta immunitaria innata. Riferimenti correlati: PMID:1698311, PMID:23264655
• In concerto con LBP, CD14 lega LPS monomerico e lo consegna al complesso LY96/TLR4, guidando così l'attivazione di NF-kappa-B e la secrezione di citochine pro-infiammatorie attraverso vie dipendenti da MyD88, TIRAP e TRAF6. Riferimenti correlati: PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• Inoltre, CD14 agisce come corecettore per gli eterodimeri TLR2:TLR6 e TLR2:TLR1, riconoscendo rispettivamente lipopeptidi diacilati e triacilati e innescando una segnalazione dipendente dai lipid rafts. Riferimenti correlati: PMID:16880211
• CD14 lega anche LDL elettronegativa (LDL(-)) e media il rilascio di citochine indotto da LDL(-), implicandolo nell'infiammazione correlata all'aterosclerosi. Riferimenti correlati: PMID:23880187
• A livello proteico, CD14 è rilevato fortemente sulla superficie dei monociti e debolmente sui granulociti; è espresso anche dalla maggior parte dei macrofagi tissutali. Riferimenti correlati: PMID:1698311
• Subcellularmente, CD14 è localizzato sulla membrana cellulare, arricchito nei membrane rafts, e si trova anche nell'apparato di Golgi; esiste anche una forma secreta.
• La proteina è una glicoproteina ancorata a GPI con ripetizioni ricche di leucine e legami disolfuro, caratteristiche fondamentali per la sua funzione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Per la colorazione in citometria a flusso, titolare l'anticorpo coniugato utilizzando cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) umane o leucociti di scimmia cynomolgus per determinare la diluizione ottimale.
• Poiché CD14 è una proteina di membrana ancorata a GPI, utilizzare un protocollo di colorazione di superficie cellulare; evitare la permeabilizzazione a meno che non si intenda effettuare una colorazione intracellulare, poiché ciò potrebbe alterare i complessi localizzati nei raft.
• Considerare una co-colorazione con marcatori di monociti/macrofagi (es. CD16, CD163) e coloranti di vitalità per identificare accuratamente le popolazioni monocitarie.
• Verificare la reattività crociata in campioni di cynomolgus se si procede a studi su primati non umani; la reattività riportata dell'anticorpo con il cynomolgus consente ricerche traslazionali.
• Poiché CD14 può essere rilasciato in forma solubile, evitare eccessivi passaggi di lavaggio che potrebbero rimuovere l'anticorpo legato in modo labile; utilizzare un tampone di colorazione PBS/BSA 0,5%.
• Per l'analisi dei dati, utilizzare controlli di compensazione appropriati quando si usa e identificare le popolazioni di monociti/macrofagi in base a FSC/SSC.

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