Anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD4 umano/scimmia per citometria a flusso - P01730

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione del CD4

• Il CD4 è una glicoproteina transmembrana di tipo I da 51 kDa appartenente alla superfamiglia delle immunoglobuline, espressa sulla superficie delle cellule T helper, dei macrofagi, delle cellule dendritiche e delle cellule NK come caratteristica distintiva dei linfociti T helper.
• In qualità di corecettore, il CD4 si lega alle molecole MHC di classe II sulle cellule presentanti l'antigene, interagendo simultaneamente con il recettore delle cellule T (TCR) per reclutare la chinasi Src LCK, che avvia cascate di segnalazione responsabili dell'attivazione delle cellule T, della produzione di citochine e della differenziazione.
• Nel timo, il CD4 partecipa alla selezione positiva e all'impegno della linea delle cellule T helper CD4+, essenziali per l'immunità adattativa.
• Il CD4 funge da recettore primario per HIV-1, mediando l'ingresso virale nelle cellule ospiti; viene successivamente sottoregolato dalla proteina accessoria Vpu di HIV-1 per favorire l'evasione immunitaria. Riferimenti correlati: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169
• Il CD4 agisce inoltre come recettore cellulare per l'ingresso dell'herpesvirus umano 7 (HHV-7). Riferimenti correlati: PMID:7909607
• Le modifiche post-traduzionali includono la glicosilazione legata all'N, la formazione di ponti disolfuro nei suoi domini extracellulari simili alle immunoglobuline e la palmitoilazione a livello di un residuo di cisteina citoplasmatico, che modula la localizzazione sulla membrana e la segnalazione.
• La proteina è localizzata prevalentemente sulla membrana plasmatica tramite un'unica elica transmembrana, con la regione extracellulare organizzata in quattro domini simili alle immunoglobuline (D1–D4) fondamentali per le interazioni con i ligandi.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per generare questo anticorpo è una proteina CD4 umana ricombinante; pertanto, l'anticorpo riconosce epitopi nativi dipendenti dalla conformazione ed è adatto alla colorazione di superficie nella citometria a flusso.
• Per le applicazioni FC, titolare l'anticorpo utilizzando cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC) umano o di macaco cinomolgo per determinare la concentrazione ottimale. Includere appropriati controlli isotipici ed eseguire il blocco dei recettori Fc, se necessario.
• È possibile prendere in considerazione la colorazione del sangue intero o la colorazione di sospensioni unicellulari di tessuto linfoide, seguendo i protocolli standard con anticoagulanti e coloranti di vitalità appropriati.
• Le fasi di fissazione e permeabilizzazione devono essere validate, poiché possono alterare l'accessibilità degli epitopi; per la colorazione intracellulare, utilizzare protocolli ottimizzati per gli antigeni di membrana.
• Assicurarsi che le impostazioni di compensazione dello strumento siano calibrate correttamente per il fluoroforo , al fine di evitare la sovrapposizione spettrale, in particolare nei pannelli multicolore.

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