anticorpo monoclonale di coniglio anti-HLA-DR umano/di scimmia per FC - P01903

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di HLA-DRA

• HLA-DRA codifica la catena alfa della molecola HLA-DR dell'MHC di classe II, che si associa alla catena beta (HLA-DRB) per presentare gli antigeni alle cellule T CD4+, attivando le risposte immunitarie adattative, inclusa la produzione di anticorpi e l'attivazione dei macrofagi.
  Riferimenti correlati:
  PMID:15265931 PMID:15322540 PMID:17334368
• Presenta antigeni peptidici extracellulari di 10–30 amminoacidi generati dalla proteolisi lisosomiale degli antigeni endocitati; un grande residuo idrofobico in posizione 1 del peptide è fondamentale per il legame stabile con l'MHCII.
  Riferimenti correlati:
  PMID:8145819
• Nei tumori, HLA-DR presenta peptidi antigenici derivati da cellule tumorali apoptotiche fagocitate o dalla macropinocitosi di proteine tumorali secrete, modellando l'immunità antitumorale.
  Riferimenti correlati:
  PMID:31495665
• La macroautofagia intrappola le proteine intracellulari negli autolisosomi; i loro peptidi vengono quindi presentati da HLA-DR, un processo importante per la selezione delle cellule T timiche e la tolleranza centrale.
  Riferimenti correlati:
  PMID:17182262 PMID:23783831
• Sono operative due modalità di selezione degli epitopi: “legarsi prima, tagliare/rifinire dopo” per gli antigeni derivati da patogeni e “tagliare prima, legarsi dopo” per i peptidi self, influenzando l'immunodominanza.
  Riferimenti correlati:
  PMID:25413013
• La localizzazione subcellulare comprende la membrana cellulare, il reticolo endoplasmatico, gli endosomi precoci e tardivi, i lisosomi e gli autolisosomi, riflettendo il suo traffico dinamico durante l'elaborazione degli antigeni.
• L'espressione tissutale è limitata alle cellule professionali presentanti l'antigene (macrofagi, cellule dendritiche e cellule B) e alle cellule epiteliali timiche.
• Le modificazioni post-traduzionali includono la glicosilazione N-linked, i ponti disolfuro, i legami isopeptidici e la coniugazione simile all'ubiquitina, che modulano la stabilità dell'MHCII e il caricamento dei peptidi.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• è un fluoroforo brillante e fotostabile coniugato direttamente all'anticorpo; non è necessario alcun reagente di rilevazione secondario, riducendo al minimo il fondo aspecifico nella citometria a flusso.
• Questo anticorpo monoclonale di coniglio è diretto contro la catena HLA-DRA quasi invariabile, rendendolo un marcatore pan-HLA-DR per le cellule immunitarie umane e della scimmia cynomolgus.
• Per una colorazione ottimale, titolare l'anticorpo nel tipo cellulare pertinente per determinare la concentrazione che garantisce la massima separazione tra le popolazioni positive e negative. Includere controlli isotipici appropriati e il blocco Fc, se necessario.
• Validare il pannello di colorazione con controlli a singolo colore e controlli fluorescence minus one (FMO) per garantire una compensazione e un gating accurati, soprattutto negli esperimenti multicolore.
• Prendere in considerazione la fissazione delle cellule dopo la colorazione con un fissativo compatibile, per preservare la fluorescenza e la stabilità del campione per analisi successive.

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