Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Ki67 umano/di scimmia per citometria a flusso intracellulare - P46013

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione del Ki67

• La proteina Ki-67 marcatrice della proliferazione (antigene KI-67, MKI67) è una grande proteina nucleare (358,7 kDa) che si associa alla superficie dei cromosomi mitotici e svolge un duplice ruolo: repellente cromosomico durante la mitosi precoce e attrattore durante la mitosi tardiva.
• Durante la mitosi precoce, il Ki-67 forma strutture a spazzola estese sui cromosomi, impedendo il loro collasso in un'unica massa di cromatina mediante barriere steriche ed elettrostatiche, consentendo così la motilità indipendente dei cromosomi. Riferimenti correlati: PMID:27362226
• Durante l'anafase mitotica, la defosforilazione del Ki-67 e l'esposizione di una regione basica conservata inducono la separazione di fase liquido-liquido dipendente dall'RNA sulla superficie cromosomica, trasformando il Ki-67 in un attrattore cromosomico che promuove il raggruppamento e l'esclusione delle particelle citoplasmatiche dal futuro spazio nucleare. Riferimenti correlati: PMID:32879492, PMID:39153474
• Il Ki-67 si lega al DNA, con preferenza per il DNA superavvolto e ricco di AT, e durante l'anafase si lega anche agli RNA ribosomiali immaturi, contribuendo alla separazione di fase. Riferimenti correlati: PMID:10878551, PMID:28935370
• La proteina si localizza sui cromosomi, nel nucleo e, in modo prominente, nel nucleolo durante l'interfase.
• È soggetta a molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione e formazione di legami isopeptidici, nonché a splicing alternativo e ubiquitinazione (parole chiave: acetilazione, splicing alternativo, fosfoproteina, coniugazione Ubl).
• Lo splicing alternativo genera molteplici isoforme di MKI67, contribuendo alla diversità funzionale.

Linee guida sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che comprende i residui 2271–2370 del Ki67 umano, garantendo la specificità dell'epitopo per la rilevazione intracellulare.
• Per la citometria a flusso intracellulare, ottimizzare accuratamente le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per consentire all'anticorpo di accedere al Ki-67 nucleare preservando al contempo l'integrità dell'epitopo.
• Si consiglia di titolare il coniugato per determinare la concentrazione ottimale per il tipo di cellule e il protocollo di colorazione utilizzati.
• Validare l'anticorpo in cellule umane e di scimmia proliferanti, utilizzando controlli isotipici appropriati e cellule non stimolate o arrestate in G0 come controlli negativi.
• Evitare l'esposizione prolungata alla luce per proteggere il fluoroforo ; seguire le pratiche standard per la conservazione e la manipolazione degli anticorpi coniugati.

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