Anticorpo monoclonale coniugato coniugato con coniglio anti-CD117/c-Kit di topo per citometria a flusso - P05532

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD117/c-Kit

• CD117/c-Kit è un recettore tirosin-chinasico per il fattore delle cellule staminali (SCF/KITLG), codificato dal gene Kit. Multiple isoforme mostrano distribuzioni tissutali distinte.
• Al legame con SCF, KIT attiva cascate di segnalazione a valle che includono le vie PI3K/AKT, RAS/MAPK e JAK/STAT, le quali regolano sopravvivenza, proliferazione cellulare, ematopoiesi e gametogenesi.
• La struttura del recettore include cinque domini extracellulari simili alle immunoglobuline, un'elica transmembrana singola e un dominio tirosin-chinasico intracellulare.
• KIT è principalmente un recettore di membrana cellulare; subisce internalizzazione dopo l'attivazione e può localizzarsi transitoriamente nel citoplasma.
• L'autofosforilazione sui residui di tirosina innesca la segnalazione a valle, mentre l'ubiquitinazione regola la degradazione del recettore e l'attenuazione del segnale.
• Le isoforme 1 e 2 sono espresse nel midollo osseo, negli spermatogoni e negli spermatociti; l'isoforma 3 è rilevata nelle cellule germinali in stadi successivi. L'isoforma 1 è ampiamente espressa nei tessuti ematopoietici.
• Come proto-oncogene, KIT è associato a processi oncogenici quando disregolato; le sue mutazioni o sovraespressione sono collegate a varie neoplasie maligne.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Questo coniugato è validato per citometria a flusso diretta su campioni di topo. Per altre applicazioni (es. IHC, WB), si raccomandano ottimizzazione e validazione indipendente.
• L'immunogeno corrisponde al dominio extracellulare (aa 25–523), rendendo l'anticorpo adatto per la colorazione di superficie di cellule vive senza permeabilizzazione.
• Eccitazione e rilevamento: può essere eccitato da un laser rosso (633–640 nm) e rilevato nel canale APC. Assicurare una corretta compensazione nei pannelli multicolore.
• Per migliorare la discriminazione tra cellule vive/morte, considerare una colorazione combinata con un colorante di vitalità, poiché il CD117 può essere rilasciato o internalizzato nelle cellule apoptotiche.
• Per la citometria a flusso quantitativa, includere un controllo isotipo appropriato ed eseguire una titolazione dell'anticorpo per determinare le concentrazioni ottimali di colorazione.

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