Anticorpo monoclonale coniglio anti-mouse CD23 per citometria a flusso - P20693

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione del CD23

• Il CD23, noto anche come Fc-epsilon-RII o recettore Fc per immunoglobulina epsilon a bassa affinità, è una proteina transmembrana di tipo II che agisce come recettore per IgE e CR2/CD21. Esiste in due isoforme (CD23a e CD23b) generate da splicing alternativo, che differiscono nei loro domini citoplasmatici.
• Sulle cellule B, il CD23 è un regolatore chiave della sintesi delle IgE e della differenziazione delle cellule B. Medita la cattura di antigeni dipendente da IgE e la successiva presentazione alle cellule T, influenzando così l'immunità umorale.
• Nei macrofagi, il legame delle IgE e l'incrocio degli antigeni tramite CD23 innesca l'uccisione intracellulare dei parassiti attraverso l'attivazione della via L-arginina-ossido nitrico.
• Il CD23 si localizza principalmente alla membrana cellulare, ma può anche essere rilasciato come recettore solubile per clivaggio proteolitico, agendo come molecola secreta che modula ulteriormente le risposte immunitarie.
• La proteina subisce modifiche post-traduzionali tra cui glicosilazione N-legata, palmitoilazione e formazione di ponti disolfuro. Contiene anche un dominio lectina di tipo C e un sito di legame del calcio.
• Come indicato dalle parole chiave UniProt, il CD23 è una lipoproteina, un proteoglicano e una proteina legante le IgE, evidenziando i suoi diversi ruoli biochimici e l'associazione di membrana.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno utilizzato per questo anticorpo era una proteina di fusione ricombinante che copre gli amminoacidi 50-331 del CD23 murino. Questa regione comprende il dominio lectina extracellulare, garantendo il riconoscimento specifico della proteina nativa.
• L'anticorpo è coniugato direttamente ad , un fluoroforo rosso lontano compatibile con comuni strumenti di citometria a flusso. Il suo profilo di eccitazione/emissione (∼686/713 nm) permette una buona separazione da altri coloranti comuni come FITC, PE o APC.
• Per la citometria a flusso, considerare di testare l'anticorpo in un intervallo di diluizioni (es. 0,5–5 µg/mL) su splenociti murini o leucociti del sangue periferico, dove il CD23 è espresso sulle cellule B e su alcune cellule mieloidi.
• Includere controlli di isotipo appropriati e passaggi di blocco dei recettori Fc per minimizzare il legame non specifico, specialmente in campioni con alta espressione di FcγR.
• Dato che il peso molecolare previsto è di ~37 kDa (non glicosilato) ma la glicoproteina matura migra a ~45–50 kDa su SDS-PAGE, questo anticorpo potrebbe non essere adatto per il western blotting a meno che le condizioni riducenti/daturanti non siano attentamente ottimizzate. La sua applicazione riportata è specificamente la citometria a flusso.
• Validare la colorazione nel ceppo di topo specifico e nel sottoinsieme cellulare di interesse, poiché i livelli di espressione del CD23 possono variare con lo stato di attivazione e il microambiente.

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