anticorpo monoclonale di coniglio anti-CD366 (TIM-3) di topo per citometria a flusso - Q8VIM0

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di CD366 (TIM-3)

• CD366 (TIM-3), noto anche come TIMD-3 o omologo del recettore cellulare 2 del virus dell'epatite A, è una glicoproteina transmembrana di tipo I della superfamiglia delle immunoglobuline con un dominio mucinico, codificata dal gene Havcr2 nei topi. Funziona come recettore dei checkpoint immunitari con funzioni sia inibitorie sia stimolatorie, a seconda del contesto cellulare.
• TIM-3 regola negativamente le risposte autoimmuni e alloimmuni mediate dalle cellule Th1, promuovendo la tolleranza immunologica. Riferimenti correlati: PMID:14556006 PMID:18006747
• Il legame con il ligando galectina-9 (LGALS9) induce l'apoptosi e la soppressione delle cellule T, mediate dalla fosforilazione di HAVCR2 e dalla dissociazione di BAG6, modulando così l'immunità antivirale e antitumorale. Riferimenti correlati: PMID:22863785
• TIM-3 agisce come recettore per la fosfatidilserina (PtSer) in modo calcio-dipendente, facilitando la fagocitosi delle cellule apoptotiche da parte delle cellule dendritiche e promuovendo la tolleranza immunologica. Riferimenti correlati: PMID:19224762 PMID:20083673
• Nell'immunità innata, TIM-3 sui macrofagi regola l'attivazione e, sulle cellule dendritiche, agisce in sinergia con i recettori Toll-like per aumentare la secrezione di TNF. Nelle cellule dendritiche infiltranti il tumore, sopprime le risposte innate mediate dagli acidi nucleici interferendo con HMGB1. Riferimenti correlati: PMID:11823861 PMID:18006747 PMID:22842346
• TIM-3 è espresso anche sulle cellule natural killer (NK), dove può co-stimolare la produzione di IFN-γ in risposta a LGALS9 oppure sopprimere la citotossicità mediata dalle cellule NK; il suo ruolo regolatorio negativo è particolarmente evidente nello shock endotossico indotto da LPS. Riferimenti correlati: PMID:25337993
• È localizzato prevalentemente nella membrana cellulare e nelle giunzioni cellulari; esiste anche un'isoforma secreta risultante dallo splicing alternativo. Durante la segnalazione, la proteina subisce glicosilazione N-linked, formazione di legami disolfuro e fosforilazione.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno comprende il dominio extracellulare (amminoacidi 20-191), si prevede che questo anticorpo rilevi TIM-3 di superficie su cellule vive non permeabilizzate; verificare nel proprio sistema sperimentale.
• Per la citometria a flusso, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo mediante titolazione su controlli positivi (ad esempio, cellule Th1 attivate) e negativi (cellule T naïve).
• è un fluoroforo eccitato dal rosso, compatibile con laser standard da 633–647 nm; assicurarsi di eseguire una corretta compensazione utilizzando controlli a singolo colore nei pannelli multicolore.
• Valutare l'uso di reagenti bloccanti per i recettori Fc al fine di ridurre il legame aspecifico quando si lavora con cellule immunitarie di topo.
• L'espressione di TIM-3 è dinamica; convalidare la colorazione in condizioni di stimolazione appropriate (ad esempio, attivazione anti-CD3/CD28) e nel ceppo di topo di interesse.

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