Anticorpo monoclonale coniglio contro topo CD45 per IF/ICC e FC - P06800

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di CD45

• CD45 (PTPRC) è una tirosina-protein fosfatasi di tipo recettoriale essenziale per l'attivazione dei linfociti T tramite il recettore antigenico, agisce come regolatore positivo della coattivazione dei linfociti T dopo il legame con DPP4.
• La proteina contiene due domini fosfatasi: il primo ha attività enzimatica intrinseca, mentre il secondo influisce sulla specificità per il substrato del primo.
• L'impiombatura alternativa genera più isoforme, tra cui B220, un marcatore ben noto per le cellule B e alcuni sottogruppi di linfociti T attivati.
• CD45 si localizza prevalentemente sulla membrana cellulare, arricchita nelle zolle di membrana e nella sinapsi immunologica, dove modula la segnalazione.
• Dopo l'impegno del recettore dei linfociti T, CD45 recluta e defosforila effettori a valle come SKAP1 e FYN, e modula l'attività di LYN.
• L'interazione con CLEC10A sulle cellule dendritiche immature nel sito di contatto con i linfociti T riconosce CD45 che porta l'antigene Tn, contribuendo a regolare finemente le soglie di attivazione dei linfociti T e limitare l'autoreattività.
• La proteina è estensivamente glicosilata e fosforilata, ed è classificata come proteina di membrana di tipo I a passaggio singolo con un peptide segnale, regioni a ripetizione in tandem e un'elica transmembrana.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno comprende il dominio extracellulare (amminoacidi 26–566) di CD45 di topo, coprendo la regione dove avviene l'impiombatura alternativa specifica per l'isoforma; l'anticorpo può pertanto riconoscere più isoforme di CD45.
• Per la citometria a flusso, si consiglia di titolare l'anticorpo su una popolazione cellulare rilevante (es. splenociti di topo) per determinare il segnale-rumore ottimale. Utilizzare controlli appropriati (controllo isotipo, controllo "fluorescenza meno uno") per discriminare accuratamente i leucociti CD45 positivi.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), la permeabilizzazione potrebbe non essere necessaria per la colorazione superficiale di CD45, ma le condizioni di fissazione e permeabilizzazione devono essere ottimizzate per la co-colorazione di marcatori intracellulari. Utilizzare un set di filtri compatibile con il rosso lontano (es. linea laser a 647 nm) per la rilevazione.
• Sebbene sia validato per IF/ICC e FC, l'anticorpo potrebbe essere adatto per altre applicazioni; tuttavia, gli utenti finali devono validarne le prestazioni nel loro sistema di analisi specifico con il tipo di campione rilevante.

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